鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學功能的初步研究.pdf

1、B7-H4（別稱B7S1或B7x），是2003年發(fā)現(xiàn)的B7家族新分子。人的B7-H4基因含有5個內含子和6個外顯子，編碼區(qū)基因長度為849個bp，位于人染色體的1p11.1。作為一種重要的負性刺激因子，當B7-H4分子與相應受體結合后，會抑制ERK和JNK蛋白激酶活性，抑制IL-2基因轉錄,阻斷了PI3K/AKT途徑，從而影響了細胞周期和細胞凋亡，抑制一些細胞因子的分泌和 T細胞的增殖。越來越多的文獻報道，B7-H4分子高表達于多種腫瘤

2、中，如肺癌、腎癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和食管癌等。另外，在一些腫瘤浸潤性巨噬細胞及腫瘤的血管內皮細胞也檢測到B7-H4的高量表達，這些研究顯示B7-H4作為一種新的腫瘤標志物為研究其在機體腫瘤免疫逃逸中的機制和癌癥的治療提供了幫助。
　　本課題組在來源于人扁桃體的部分淋巴細胞中檢測到B7-H4受體的表達，并以此為基礎研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體，并運用本課題組建立的非小細胞肺癌細胞株SPCA-1與Jurkat細胞

3、共培養(yǎng)的體系初步研究了單克隆抗體的生物學功能。
　　鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學功能的初步研究
　　【目的】
　　研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體并初步研究其生物學功能
　　【方法】
　　從人體扁桃體組織中獲取淋巴細胞，并以此為免疫原，免疫5~8周齡的BALB/c小鼠，融合當天取小鼠脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞Ag8融合。一段時間后，運用流式細胞技術(FCM)對雜交瘤上清進行初步篩選，以B

4、7-H4-mFc-FITC為基礎，通過位點競爭抑制試驗進一步篩選，再通過多次亞克隆技術獲得能穩(wěn)定分泌抗B7-H4受體單克隆抗體的細胞株。通過快速試紙法測定目標單抗的Ig亞型，對純化后的單抗標記生物素后借助Western Blot實驗和ELISA實驗對單克隆抗體進行鑒定。結合本課題組建立的SPCA-1細胞與Jurkat細胞共培養(yǎng)的體系初步研究單克隆抗體的功能。
　　【結果】
　　獲得了一株能穩(wěn)定分泌鼠抗人 B7-H4受體的單克

5、隆抗體，命名為7B11。經(jīng)快速試紙法鑒定7B11為IgG1類，Western Blot結果顯示7B11不能與人B7-H4受體蛋白特異性結合，但ELISA實驗結果表明7B11能特異性識別B7-H4受體蛋白。將7B11加入到SPCA-1細胞與Jurkat細胞共培養(yǎng)的體系作用72小時后，能阻斷SPCA-1細胞表達的B7-H4分子對Jurkat細胞的作用，使Jurkat細胞上CD3、CD69的表達水平及細胞增殖水平趨近正常。
　　【結論】