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文檔簡介
1、目的 建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2分子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株:研究抗體的生物學(xué)特性及功能;建立人可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 方法 應(yīng)用B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)建立分泌抗人B7-2單抗的雜交瘤細(xì)胞株;快速定性試紙法鑒定單抗的亞類;體內(nèi)誘生腹水法制備單抗;免疫親和層析法純化抗體;間接免疫熒光法分析單抗對細(xì)胞膜型B7-2分子的識別:MTT法檢測單抗對Daudi的生長抑制和對PBTCs增殖的抑制作用;競爭抑制實驗分
2、析單抗識別的抗原位點。生物素標(biāo)記抗體后建立可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 結(jié)果 獲取一株穩(wěn)定分泌抗人B7-2分子單抗的雜交瘤,命名為6A5:快速定性試紙法鑒定6A5屬小鼠IgGl亞類及K型;經(jīng)體內(nèi)誘生腹水法制備單抗,小鼠腹水形成的陽性率約為80%,腹水的收獲量平均為5.9ml/只小鼠;經(jīng)免疫親和層析法純化,腹水中抗體蛋白的得率為1.1mg/ml:單抗6A5與L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和
3、Daudi的陽性結(jié)合率分別為99.9%、4.6%、90.6%、79.6%和99.1%;將6A5(終濃度為5μg/ml)加入到Daudi細(xì)胞的培養(yǎng)體系中,經(jīng)顯微鏡觀察及MTT法分析,6A5對Daudi細(xì)胞的生長具有抑制作用。以絲裂霉素處理的L929-B7-2為刺激細(xì)胞,PBTCs為反應(yīng)細(xì)胞,加入6A5共同培養(yǎng):經(jīng)MTT法分析,6A5能阻斷B7-2介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號,抑制PBTCs增殖:通過Biotin標(biāo)記B7-2單抗,建立了人sB7-2分
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