抗重組人表皮生長因子單克隆抗體的制備及臨床應(yīng)用初探.pdf

1、目的:制備能穩(wěn)定分泌特異性抗重組人表皮生長因子(recombinant human epidermal growth factor rhEGF)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,建立ABC ELISA定量檢測人EGF的方法,為腫瘤的診斷與治療提供具有實(shí)用價(jià)值的研究工具,為EGF的親和層析純化提供實(shí)驗(yàn)材料.此外應(yīng)用抗rhEGF的單克隆抗體初步探討EGF與腫瘤的關(guān)系.方法:以Balb/c小鼠脾細(xì)胞為滋養(yǎng)細(xì)胞,運(yùn)用細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備,間接ELISA法

2、篩選出能穩(wěn)定分泌針對人表皮生長因子的單克隆抗體細(xì)胞株.對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析并以體內(nèi)誘生法產(chǎn)生腹水以獲得大量單克隆抗體,并采用Protein A-Sepharose柱對其純化,SDS-PAGE鑒定IgG純度,間接ELISA法檢測腹水效價(jià)及抗體的親和常數(shù),快速定性試紙鑒定McAb的IgG亞類,采用間接ELISA法相加實(shí)驗(yàn)鑒定抗原識別表位.用活化生物素(生物素-N-羥琥珀酰亞胺酯 BNHS)標(biāo)記其中一株單克隆抗體EGF-B<,2>,

3、用DOT-ELISA檢測標(biāo)記效果,最后建立ABC-ELISA定量檢測人EGF的方法,并初步應(yīng)用到正常人和腫瘤病人血清EGF的定量檢測中.結(jié)論:利用鼠-鼠雜交瘤技術(shù),成功地制備了3株穩(wěn)定分泌高效價(jià)、高特異性抗人EGF的雜交瘤細(xì)胞株,產(chǎn)生的McAb特異性好,親和力高.建立的ABC-ELISA定量檢測人EGF的方法穩(wěn)定性好,特異性強(qiáng)和靈敏度高,具有替代放射免疫分析法的趨勢.應(yīng)用該方法檢測并比較腫瘤病人與正常人血清中EGF含量的結(jié)果表明:EGF