重組人顆粒溶素的純化及其單克隆抗體的制備.pdf

1、目的：純化原核表達的重組人顆粒溶素(GNLY)，并制備其單克隆抗體(mAb)，為GNLY相關(guān)疾病的診斷提供一種新指標。
　　 方法：Ni離子親和層析法純化重組人GNLY，用其免疫BALB/c小鼠，采用常規(guī)雜交瘤技術(shù)制備相應mAb。間接ELISA法測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清和腹水mAb的效價，ELISA相加試驗測定抗原表位，硫氰酸鹽洗脫法測定相對親和力指數(shù)，并行Ig亞類、特異性及雜交瘤細胞分泌mAb的穩(wěn)定性檢測。
　　 結(jié)果：純

2、化的重組GNLY融合蛋白，其純度和含量分別為95％和0.8g/L。共篩選出能穩(wěn)定分泌抗人GNLY mAb的雜交瘤細胞4株，分別命名為5E5、5G7、6C8和9C6。4株雜交瘤細胞培養(yǎng)上清及腹水中mAb的效價分別為1∶100～1∶3200和(0.2～8)×10-4。5E5雜交瘤細胞株分泌mAb的Ig亞類為IgM，其余3株mAb為IgGl。4株雜交瘤細胞體外連續(xù)培養(yǎng)2個月及液氮凍存6個月后復蘇，分泌mAb的水平仍能達到之前的水平。4株mAb