重組人顆粒溶素的純化及其單克隆抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：純化原核表達(dá)的重組人顆粒溶素(GNLY)，并制備其單克隆抗體(mAb)，為GNLY相關(guān)疾病的診斷提供一種新指標(biāo)。
　　 方法：Ni離子親和層析法純化重組人GNLY，用其免疫BALB/c小鼠，采用常規(guī)雜交瘤技術(shù)制備相應(yīng)mAb。間接ELISA法測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水mAb的效價(jià)，ELISA相加試驗(yàn)測(cè)定抗原表位，硫氰酸鹽洗脫法測(cè)定相對(duì)親和力指數(shù)，并行Ig亞類(lèi)、特異性及雜交瘤細(xì)胞分泌mAb的穩(wěn)定性檢測(cè)。
　　 結(jié)果：純

2、化的重組GNLY融合蛋白，其純度和含量分別為95％和0.8g/L。共篩選出能穩(wěn)定分泌抗人GNLY mAb的雜交瘤細(xì)胞4株，分別命名為5E5、5G7、6C8和9C6。4株雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水中mAb的效價(jià)分別為1∶100～1∶3200和(0.2～8)×10-4。5E5雜交瘤細(xì)胞株分泌mAb的Ig亞類(lèi)為IgM，其余3株mAb為IgGl。4株雜交瘤細(xì)胞體外連續(xù)培養(yǎng)2個(gè)月及液氮凍存6個(gè)月后復(fù)蘇，分泌mAb的水平仍能達(dá)到之前的水平。4株mAb

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