豬a-干擾素單克隆抗體的制備及其特性鑒定.pdf

1、IFN-α（interferon alpha，IFN-α）是在特定誘生劑的作用下由細胞產(chǎn)生的一種具有生物活性的糖蛋白，可誘導同種動物細胞產(chǎn)生廣譜的抗病毒活性。目前已發(fā)現(xiàn)近百種疫病能通過動物傳染給人，其中很多為病毒性傳染病，有些目前尚未發(fā)現(xiàn)合適的疫苗和藥物來預防和治療，有些對病毒的生物學特性仍未研究清楚。IFN-α是抗病毒能力最強的干擾素，但無論是醫(yī)學還是獸醫(yī)學領域對IFN-α臨床應用仍然極為有限，因此開展IFN-α單克隆抗體的研制，為評

2、價機體抗病毒水平以及IFN-α作用機制研究奠定基礎，對推動IFN-α在臨床上廣泛應用具有重要作用。 本研究運用雜交瘤細胞技術，以重組豬IFN-α蛋白免疫BALB/c小鼠，無菌條件下制備小鼠免疫脾細胞，與骨髓瘤細胞SP2/0細胞融合，通過通過GST和GST-pIFN-a雙重篩選和多次克隆化培養(yǎng)，成功獲得了3株能分泌抗IFN-α的單克隆雜交瘤穩(wěn)定細胞株。用單克隆抗體亞型鑒定試劑盒鑒定其亞型，確定1株單克隆抗體為IgG2a，2株單克隆

3、抗體為IgG2b。將分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株的染色體計數(shù)，發(fā)現(xiàn)雜交瘤細胞株染色體平均數(shù)為92條，而骨髓瘤細胞株染色體平均數(shù)僅為66條，從遺傳角度證明確實獲得了雜交瘤細胞株；雜交瘤細胞腹水和細胞上清經(jīng)ELISA檢測，腹水中3株雜交瘤分泌單抗的效價均可達1：105，而細胞上清的效價可達到1：104；單抗的抗原結合位點分析表明，3株單抗的抗原結合位點基本一致；SDS-PAGE結果顯示，3株單抗的重鏈分子量均在60ku以上，輕鏈分子量在30