分子生物學快速鑒定分枝桿菌方法學比較及其耐藥研究.pdf

1、目的：
　　 應用評價4種分枝桿菌分子生物學快速檢測方法，同時比較2種分枝桿菌藥敏方法，旨在為臨床選擇最準確、快速的分枝桿菌鑒定及藥敏方法。
　　 方法：
　　 收集204株臨床疑似分枝桿菌，接種于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)37℃孵育，挑取陽性單個菌落進行抗酸染色和膠體金免疫層析法來初步區(qū)分結(jié)核分枝桿菌與非結(jié)核分枝桿菌。同時以16SrRNA基因測序方法為標準，采用hsp65基因測序、hsp65PCR-RFLP和HAIN基因分

2、型等方法比較鑒定菌株；分枝桿菌的藥敏結(jié)果采用試管比例法和分格平板比例法兩種方法進行比較。
　　 結(jié)果：
　　 羅氏培養(yǎng)基上204株臨床疑似分枝桿菌生長良好，抗酸染色均為陽性。膠體金免疫層析法結(jié)果顯示有113株結(jié)核分枝桿菌及91株非結(jié)核分枝桿菌。
　　 16SrRNA基因測序方法結(jié)果為：113株結(jié)核分枝桿菌，40株胞內(nèi)分枝桿菌，15株龜分枝桿菌復合群，8株偶發(fā)分枝桿菌，6株堪薩斯分枝桿菌復合群，5株鳥分枝桿菌，4株

3、恥垢分枝桿菌，3株草分枝桿菌，2株瘰疬分枝桿菌，2株地分枝桿菌，2株不產(chǎn)色分枝桿菌，2株戈登分枝桿菌，1株金色分枝桿菌和1株新金色分枝桿菌。
　　 與16SrRNA基因測序相比較，hsp65PCR-RFLP結(jié)果3株草分枝桿菌、1株偶發(fā)分枝桿菌及1株不產(chǎn)色分枝桿菌與其不符；其余菌株鑒定結(jié)果一致，符合率為97.5％(199/204)；hsp65基因測序結(jié)果1株胞內(nèi)分枝桿菌、1株愛爾蘭分枝桿菌及1株地分枝桿菌與16SrRNA測序結(jié)果不

4、符，其余菌株鑒定結(jié)果與其一致，符合率為98.5％(201/204)；HAIN基因分型結(jié)果除了6株菌株只能鑒定為分枝桿菌屬以外，其余198株分枝桿菌均能鑒定到種，鑒定符合率為97.1％。
　　 試管比例法結(jié)果顯示113株結(jié)核分枝桿菌中耐異煙肼耐藥率78.76％(89/113)，利福平耐藥率65.49％(74/113)，乙胺丁醇耐藥率41.59％(47/113)，鏈霉素耐藥率57.52％(65/113)；其中泛耐藥株百分比54.87

5、％(62/113)，多重耐藥株百分比16.81％(19/113)，敏感株百分比僅為12.39％(14/113)。13種非結(jié)核分枝桿菌對常見一線抗結(jié)核藥物都有一定程度的耐藥。
　　 與試管比例法相比，分格平板瓊脂比例法異煙肼耐藥符合率為96.63％(86/89)，利福平耐藥符合率為97.29％(72/74)，鏈霉素耐藥符合率為100％，乙胺丁醇耐藥符合率為97.87％(46/47)。1株胞內(nèi)分枝桿菌及1株堪薩斯分枝桿菌分格平板瓊脂

6、比例法藥敏結(jié)果不符合，其余非結(jié)核分枝桿菌結(jié)果均符合，符合率97.80％(89/91)。
　　 結(jié)論：
　　 1、膠體金免疫層析法能初步快速區(qū)分結(jié)核分枝桿菌與非結(jié)核分枝桿菌。
　　 2、16SrRNA基因測序不能進一步鑒定部分臨床常見菌株(如堪薩斯分枝桿菌復合群和龜分枝桿菌復合群)，不推薦為臨床首選方法。
　　 3、推薦HAIN基因分型作為臨床最常見分枝桿菌鑒定的首選方法；對于HAIN基因分型不能鑒定的少見