用于細胞內生物活性分子檢測的含硒新型熒光探針的研究與應用.pdf

1、生命活動是由各種生物活性物質參與的，相互關聯(lián)、相互制約的眾多化學反應的總結果。許多生物活性物質可以與氨基酸、蛋白質或其它有機基團結合，發(fā)揮重要的生物學作用、特殊的生理功能和高度的生化效應。 近年來，檢測細胞中生物活性分子的研究越來越多，熒光法不僅簡單易行，便于操作，還具有高靈敏度、高選擇性和廣泛可用的熒光染料的特點。更加吸引人的是探針分子可以在不破壞生物活性的情況下進入細胞，與活細胞內的生物活性分子等結合生成強熒光物質，并借助于

2、激光共聚焦成像技術，實現(xiàn)細胞內待測活性分子的“可視化”，從而對它們在生命體內進行“實時在線”的檢測。最近，生物成像在活細胞的生物分子檢測上取得了巨大進展，而熒光探針由于具有高靈敏度，實時監(jiān)測等優(yōu)點成為生物成像最主要的工具。 本論文基于熒光探針與生物活性分子特異性作用后熒光光譜性質的改變從而實現(xiàn)對特定物質的檢測，并將所設計探針成功用于生物活體細胞的共聚焦顯微成像。 本論文主要開展了以下三方面的研究工作： （一）用于

3、檢測硫醇的有機硒新型熒光探針的設計與合成。 受谷胱甘肽過氧化物酶類似物Ebselen的啟發(fā)，我們將與含巰基類物質發(fā)生特異性反應的硒氮鍵引入熒光染料，設計合成了一種以羅丹明110為母體的含有硒氮鍵的新型熒光探針用于識別巰基化合物，并用IR1H-NMR，13C－NMR,77Se－NMR和MS對其進行了表征。該探針合成簡單、條件溫和、產(chǎn)率高，而且產(chǎn)品穩(wěn)定（在-4℃冰箱中放置三個月無任何變化）。 （二）用于檢測硫醇的有機硒新型熒

4、光探針的分析研究及在細胞成像中的應用。 在模擬生理條件下對探針的光譜特性進行了檢測。該探針試劑本身沒有熒光，與硫醇類物質反應后，硒氮鍵被打斷，形成羅丹明110強熒光的開環(huán)結構，熒光增強170倍。探針的激發(fā)和發(fā)射波長分別為499nm和522nm。該探針能夠高選擇性的檢測硫醇類物質，活性氧(ROS)、金屬離子、生物胺及其他抗氧化劑不干擾測定。在0.015-1.0μM范圍內GSH的濃度與熒光強度成很好的線性關系，方法的檢測限為144p