美洲大蠊成蟲腸道細(xì)菌多樣性研究.pdf

1、昆蟲是動(dòng)物界中最大的類群，現(xiàn)存種類已超過100萬種。我國昆蟲資源相當(dāng)豐富，約占世界昆蟲總數(shù)的10％。昆蟲共生菌可能是新型天然產(chǎn)物的廣泛來源和新活性天然產(chǎn)物的重要來源，但是昆蟲腸道微生物的研究尚欠系統(tǒng)和深入，所涵蓋的昆蟲種類僅零星見于少數(shù)，如蝎子、蜜蜂等。較為詳細(xì)的研究主要集中在白蟻，還有松毛蟲等農(nóng)作物害蟲，而美洲大蠊腸道微生物的研究鮮有報(bào)道。
　　本研究主要運(yùn)用數(shù)值分類，BOX-PCR，PCR-RFLP和16S rRNA基因序列的

2、系統(tǒng)發(fā)育分析以及免培養(yǎng)方法對樣品中內(nèi)生細(xì)菌多樣性進(jìn)行研究，結(jié)果表明，美洲大蠊成蟲腸道內(nèi)有較為豐富的細(xì)菌多樣性。主要結(jié)果如下:
　　數(shù)值分類的分析結(jié)果表明，32株代表菌株在82％相似水平上可分為12個(gè)表觀群，群11是最大的類群，包含14株細(xì)菌;而代表菌株SCAU13，SCAU78，SCAU23，SCAU75，SCAU9，SCAU92分別單獨(dú)成群。
　　在PCR-RFLP分析中，用四種限制性內(nèi)切酶（HaeⅢ，HinfⅠ，TaqⅠ

3、，MspⅠ）處理后，HaeⅢ有8種酶切圖譜類型，HinfⅠ有7種酶切圖譜類型，TaqⅠ有3種酶切圖譜類型，MspⅠ有2種酶切圖譜類型，酶HhaⅢ較其他3種酶的帶型豐富，可以說HhaⅢ是研究細(xì)菌多樣性較為有效的酶。
　　在BOX-PCR分析中，在72％的相似水平處，所有的菌株都聚在一起，在86％的相似水平上，供試菌株可分為10個(gè)群。在10個(gè)遺傳群中，群Ⅱ最大，共有21株菌株，其次為群Ⅳ，由7個(gè)菌株組成。
　　同過測序比對，分離

4、菌株代表20個(gè)物種，屬于4個(gè)大的系統(tǒng)發(fā)育類群(Proteobacteria，Bacteroidetes，F(xiàn)irmicutes，Actinobacteria)的10個(gè)科、15個(gè)屬。多數(shù)菌株屬于Proteobacteria門(15株，占46.9％)和Bacteroidetes門(10株，占31.3％)。Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)為4.87，均勻度指數(shù)(E)為1.62，表明美洲大蠊相關(guān)可培養(yǎng)細(xì)菌具有較高的物種多樣性和均勻度。

5、
　　在免培養(yǎng)分析中，相似性比對分析表明，26個(gè)OTU屬于細(xì)菌域4個(gè)大的系統(tǒng)發(fā)育群(Proteobacteria，Bacteroidetes，F(xiàn)irmicutes，Actinobacteria)的8個(gè)科、13個(gè)屬，多數(shù)菌株屬于變形菌門(Proteobacteria，占56.9％)和擬桿菌門(Bacteroidetes，占21.4％)，其次屬于厚壁菌門(Firmicutes，占18.8％)，還有未確定分類的細(xì)菌(unclassifi