南亞實(shí)蠅成蟲腸道微生物分子多樣性分析及引誘效果.pdf

1、南亞實(shí)蠅（Bactrocera tau）是一種重要的世界性檢疫害蟲，其食性雜，寄主廣，繁殖力強(qiáng)，防治困難，每年給果蔬業(yè)及其對(duì)外貿(mào)易造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文通過(guò)16S rDNA V3-V4高變區(qū)的高通量測(cè)序技術(shù)，分析了南亞實(shí)蠅雌、雄成蟲不同發(fā)育階段腸道內(nèi)的細(xì)菌多樣性及群落結(jié)構(gòu)組成。在此基礎(chǔ)上運(yùn)用傳統(tǒng)微生物分離和16S rDNA(V6-V8)高變區(qū)的Sanger測(cè)序相結(jié)合的方法，分離、鑒定了性成熟的雌、雄南亞實(shí)蠅成蟲腸道內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌并研究

2、了腸道細(xì)菌對(duì)寄主成蟲的引誘效果。最終為探討南亞實(shí)蠅腸道細(xì)菌對(duì)其生理功能的影響和利用微生物防治此類害蟲提供新的思路和科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　在門的分類水平上，南亞實(shí)蠅羽化未取食雌性成蟲腸道內(nèi)微生物菌群分屬于10個(gè)門，分別是變形菌門、厚壁桿菌門、擬桿菌門、放線菌門、芽單胞菌門、酸桿菌門、衣原體門、Candidatus_Saccharibacteria、梭桿菌門和浮游菌門；羽化未取食雄性成蟲腸道內(nèi)微生物菌群分屬于11個(gè)門，分別

3、是擬桿菌門、厚壁桿菌門、放線菌門、變形菌門、芽單胞菌門、Candidatus_Saccharibacteria、酸桿菌門、衣原體門、脫鐵桿菌門、梭桿菌門和浮游菌門；10日齡雌性成蟲腸道內(nèi)細(xì)菌菌群分屬于4個(gè)門，分別為變形菌門、擬桿菌門、厚壁桿菌門和放線菌門；10日齡雄性成蟲、性成熟雌性成蟲和性成熟雄性成蟲腸道內(nèi)細(xì)菌均分屬于3個(gè)門，分別是變形菌門、擬桿菌門和厚壁桿菌門，羽化未取食雌、雄性成蟲腸道內(nèi)細(xì)菌較其余多樣性高，但所有樣本的腸道優(yōu)勢(shì)細(xì)菌

4、類群均為擬桿菌門、變形菌門和厚壁菌門。
　　在綱的分類水平上，南亞實(shí)蠅羽化未取食雌性腸道內(nèi)細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌綱是γ變形菌綱；羽化未取食雄性腸道內(nèi)細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌綱為芽孢桿菌綱、γ變形菌綱、黃桿菌綱和擬桿菌綱；擬桿菌綱是10日齡雌、雄成蟲腸道細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌綱，γ變形菌綱次之；性成熟的雌、雄成蟲腸道細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌綱為擬桿菌綱和γ變形菌綱。
　　在目的分類水平上，南亞實(shí)蠅羽化未取食雌性腸道內(nèi)生細(xì)菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目和弧菌目等；羽化未取食雄性

5、腸道內(nèi)生菌在腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales、乳桿菌目、黃桿菌目、鞘脂桿菌目、假單胞目、芽孢桿菌目、伯克氏菌目、放線菌目、黃單孢菌目和梭菌目等中均有分布；10日齡雌性腸道內(nèi)生菌的優(yōu)勢(shì)菌目是腸桿菌目和擬桿菌目；10日齡雄性腸道內(nèi)生菌的優(yōu)勢(shì)菌目為腸桿菌目、擬桿菌目和Orbales；性成熟的雌性腸道內(nèi)生菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales、乳桿菌目和氣單胞菌目的細(xì)菌；性成熟的雄性成腸道內(nèi)生菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales和乳

6、桿菌目的細(xì)菌。
　　在科的分類水平上，南亞實(shí)蠅羽化未取食雌性腸道內(nèi)生菌主要分布在腸桿菌科和弧菌科；羽化未取食雄性腸道內(nèi)生菌主要分布在腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae、腸球菌科、黃桿菌科、擬桿菌科、假單胞菌科、鞘脂桿菌科、黃單胞菌科、動(dòng)性球菌科、普雷沃氏菌科、幾丁質(zhì)菌科、毛螺菌科和叢毛單胞菌科；10日齡雌性腸道內(nèi)生菌主要分布在腸桿菌科和紫單胞菌科；10日齡雄性腸道內(nèi)生菌在腸桿菌科、紫單胞菌科和Orbaceae中均有分布；性成熟

7、的雌性腸道內(nèi)生菌的優(yōu)勢(shì)菌科為腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae、腸球菌科和氣單胞菌科的細(xì)菌；性成熟的雄性腸道內(nèi)生菌的優(yōu)勢(shì)菌科為腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae和腸球菌科的細(xì)菌。
　　在屬的分類水平上，南亞實(shí)蠅羽化未取食雌性腸道優(yōu)勢(shì)菌群為腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬及普羅維登斯屬；羽化未取食雄性腸道內(nèi)的一大優(yōu)勢(shì)菌屬主要是擬桿菌門中的金黃桿菌屬、紫單胞菌科的未知菌屬、黃桿菌屬、Orbus和擬桿菌屬，其次是厚壁菌門中腸球菌科的未知菌

8、屬，最后是變形菌門中的Orbus、寡養(yǎng)單胞菌屬、腸桿菌屬、普羅威登斯菌屬、沙雷氏菌屬及假單胞菌屬。10日齡雌性腸道優(yōu)勢(shì)菌群是普羅維登斯屬、腸桿菌屬、Dysgonomonas和沙雷氏菌屬,10日齡雄性腸道內(nèi)細(xì)菌在腸桿菌屬、普羅威登斯菌屬、Dysgonomonas和Orbus中均有分布，性成熟的雌性腸道內(nèi)細(xì)菌在普羅威登斯菌屬、Orbus、沙雷氏菌屬、腸桿菌屬、Dysgonomonas和阪崎腸桿菌中均有分布，性成熟的雄性腸道內(nèi)生菌在Orbus

9、、沙雷氏菌屬、Dysgonomonas和腸桿菌屬中均有分布。
　　6個(gè)樣品及組間的腸道菌群差異性分析表明，南亞實(shí)蠅雌或者雄性成蟲不同發(fā)育階段腸道菌群的結(jié)構(gòu)及組成存在一定的差異性，而同一發(fā)育階段雌、雄腸道菌群的結(jié)構(gòu)和組成類似。
　　從性成熟的雌、雄南亞實(shí)蠅腸道分離得到41種不同的可培養(yǎng)菌，均為腸桿菌科的細(xì)菌。雌、雄腸道共同的菌屬是腸桿菌屬、普羅維登斯菌屬和沙雷氏菌屬。
　　室內(nèi)引誘實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所有供試菌株的高壓滅菌液對(duì)南亞

10、實(shí)蠅均有顯著地引誘效果，其中四株菌Enterobacter cloacae（BF16）、Enterobacter sp.（BF(12)）、Enterobacter sp.（BF23）和Enterobacter sp.（BF(32)）的高壓滅菌液對(duì)8日齡、性成熟的南亞實(shí)蠅的引誘效果較好，對(duì)8日齡南亞實(shí)蠅室內(nèi)引誘率分別達(dá)到24.33％、20.67%、14.67%和14.00%，室外引誘率分別達(dá)到9.61%、5.61%、6.06%和8.83%