脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植改善糖尿病心肌病大鼠心肌損傷的研究.pdf

1、目的：觀察間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠糖尿病心肌病的心肌損傷及心功能的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法：第一部分：構(gòu)建糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)大鼠模型，分離培養(yǎng)SD大鼠的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，SD大鼠隨機(jī)分為3組，正常組(Normal)、DCM組、DCM+ADMSCs組，18周時(shí)連續(xù)4次經(jīng)尾靜脈進(jìn)行ADMSCs移植后觀察3組大鼠血糖水平、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTTs)、腹腔注射胰島素耐量試驗(yàn)(IP

2、ITTs)變化，心肌組織行蘇木精-伊紅(HE）、馬松(Masson)、油紅O染色，Cobas8000生化儀檢測(cè)心肌損傷因子，心臟超聲儀檢測(cè)大鼠心功能，免疫熒光觀察心肌MG53蛋白表達(dá)水平，蛋白印記(Western blot)法檢測(cè)心肌組織MG53、IRS1、IR、p-Akt表達(dá)水平。第二部分：分離培養(yǎng)SD乳鼠原代心肌細(xì)胞，隨機(jī)分為3組，正常組(Normal)、高糖組(HG)、高糖+脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清組(HG+ADMSCs-CM)，

3、干預(yù)后于倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)及搏動(dòng)情況，并計(jì)算表面積，采用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(Q-PCR)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞中ANP、BNP、β-MHC mRNA表達(dá)水平。HG+ADMSCs-CM組再次分為不同濃度組(0.25mL、0.5mL、1mL、2mL)。Western blot法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞中MG53、IRS1、IR、p-Akt表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、連續(xù)4次ADMSCs移植后，DCM+ADMSCs組FBG及PBG水平與

4、DCM組比較，均明顯降低(P＜0.01)，心臟收縮及舒張功能明顯提高(P＜0.05)，心肌肥大與基質(zhì)纖維化明顯改善。MG53蛋白表達(dá)水平：DCM組與Normal組相比明顯增高，DCM+ADMSCs組與DCM組相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。IRS1、IR、p-Akt蛋白表達(dá)水平：DCM組與Normal組相比明顯降低，DCM+ADMSCs組與DCM組相比明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。2、心肌細(xì)胞體外培

5、養(yǎng)干預(yù)72h后，HG組心肌細(xì)胞與Normal組相比表面積增大，搏動(dòng)頻率減弱，ANP、BNP、β-MHC mRNA表達(dá)升高;HG+ADMSCs-CM組與HG組相比心肌細(xì)胞表面積減小，搏動(dòng)頻率增強(qiáng)，ANP、BNP、β-MHC mRNA表達(dá)降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。給予ADMSCs-CM梯度干預(yù)72h后，MG53蛋白表達(dá)水平：2mL組與0.25ml組相比減低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01);IRS1、IR、p-Akt

6、蛋白表達(dá)水平：2mL組與0.25mL組相比明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。MG53蛋白相對(duì)表達(dá)水平與IRS1、IR、p-Akt蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.75，-0.94，-0.84)。
　　結(jié)論：1、高糖血癥是DCM大鼠心肌損傷的危險(xiǎn)因素，心肌肥大及基質(zhì)纖維化是DCM的主要病理改變。2、MSCs可以降低DCM大鼠血糖水平，改善心肌損傷及心功能障礙。3、MG53蛋白的高表達(dá)參與DCM的發(fā)生發(fā)展，MSCs可能通過