脂肪間充質干細胞移植治療擴張型心肌病大鼠的研究.pdf

1、擴張型心肌?。╠ilated cardiomyopathy DCM）在心肌病中最為常見，常發(fā)展為充血性心力衰竭，預后很差，心臟病學家們一直在尋找新的治療方法，干細胞移植是一個切實可行的增加成體心肌細胞的方法。脂肪問充質干細胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs）具有多種分化潛能，將其植入損傷的心肌后，能夠在損傷區(qū)存活、增殖、并分化為心肌細胞，改善心功能。ADMSCs移

2、植在缺血性心臟病中的臨床應用已經(jīng)初見曙光，但是在擴張型心肌病等充血性心臟病方面尚屬空白。本研究為臨床應用ADMSCs移植治療擴張性心肌病提供實驗與理論依據(jù)。
　　 目的：（一）經(jīng)腹腔注射阿霉素建立wistar大鼠擴張型心肌病模型。（二）從wistar大鼠脂肪組織大量分離、培養(yǎng)ADMSCs，證明ADMSCs在5-氮雜胞苷（5-aza）誘導下可分化為心肌細胞，確定其是否可以作為一個合適的工具細胞，為后續(xù)研究做準備。（三）將同種異體A

3、DMSCs移植入DCM大鼠心肌內，觀察ADMSCs在心肌內的存活及分化情況，比較移植前后心功能及血流動力學的變化。
　　 內容和方法：1.提取大鼠脂肪組織，體外分離培養(yǎng)脂肪間充質干細胞ADMSCs，行細胞免疫組化檢測免疫表型。分析其表面CD13，CD34，CD44，CD45，CD105.2.研究wistar大鼠擴張型心肌病模型建立的方法；參考國外學者的方法，并經(jīng)改良，通過大鼠腹腔注射一定劑量的阿霉素這種非手術方法建立慢性充血性心

4、衰的DCM動物模型。最后通過心功能及病理切片檢測模型。3.將體外分離培養(yǎng)的ADMSCs移植入治療組DCM大鼠，同時將以相同體積的IMEM培養(yǎng)基移植入對照組DCM大鼠。術后4周，處死動物留取心臟，于熒光顯微鏡下觀察ADMSCs植入后存活及分化情況。于細胞移植術前、術后4周，將兩組大鼠進行超聲心動、血流動力學檢查，測定、比較心功能的指標。
　　 結果：1.在制模過程中除死亡鼠外，所有大鼠均出現(xiàn)不同程度體重增長緩慢或體重下降、脫毛、精

5、神萎靡，個別大鼠出現(xiàn)眼角糜爛。隨機抽取5只大鼠處死，解剖心臟進行病理學檢查。大體觀察心臟呈球形，室壁薄、心腔大。光鏡下觀察病理切片見心肌纖維肥大，胞腔內空泡形成，纖維組織增多，局部心肌細胞溶解等現(xiàn)象。比較心功能指標提示，造模后2周所有存活的大鼠均出現(xiàn)LVEDV及LVESV升高、左心室EF下降等心功能下降表現(xiàn)。2.從wistar大鼠脂肪組織分離培養(yǎng)出大量螺旋生長的長梭形細胞，多次傳代后，細胞呈均勻有序的向四周放射狀分布，細胞排列呈放射狀，

6、多數(shù)細胞為長梭形。這些細胞的細胞表面分子CD13、CD44、CD105皆陽性，CD34、CD45、Ⅷ因子、HLA-DR、VWF均陰性；具有成骨、成脂、成肌的多向分化能力?？梢栽隗w外連續(xù)傳代培養(yǎng)而保持穩(wěn)定的生長速度，第3至8代細胞倍增時間為55至63小時；經(jīng)2至4周液氮冷凍保存后復蘇存活率90％以上，細胞表面陽性標志保持不變；3.移植術后4周，于移植部位可見DAPI標記的ADMSCs，同時，免疫組織熒光染色發(fā)現(xiàn)部分DAPI陽性細胞TnT染

7、色也為陽性，且排列方向與心肌細胞一致。移植術后4周，對照組與ADMSCs治療組比較，左心室舒張末容積（LVEDV）及左心室收縮末容積（LVESV）減少（P<0.01），左心室每搏量（SV）、心臟射血分數(shù)（EF）、左心室收縮壓（LVSP）、左心室室內壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax）均明顯增加（P<0.05～0.01）。
　　 結論：1.本實驗的結果表明，阿霉素作用于wistar大鼠后，大體心臟觀察左心腔呈球形擴大，超聲心

8、動檢查室壁收縮動度減弱，心室壁變薄，射血功能受損，說明DCM模型建立成功。2.通過胰酶消化的方法成功地從wistar大鼠脂肪組織分離培養(yǎng)出具有多向分化潛能的ADMSCs。分離的ADMSCs具有旁分泌功能，易于在體外長期傳代培養(yǎng)、大量擴增、長期凍存。這些特征證明了ADMSCs作為細胞和基因工程備選種子細胞的基礎，也為ADMSCs進一步的實驗研究提供了一個理想的工具細胞。3.ADMSCs移植術后4周，治療組LVESP、左心室室內壓（+dp/