纈沙坦聯(lián)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性心肌梗死治療研究.pdf

1、背景：干細(xì)胞作為有潛力的治療急性心肌梗死的方式取得了一定進(jìn)步，但仍面臨一系列挑戰(zhàn)，其中心肌粳死后產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)是阻礙其療效發(fā)揮的關(guān)鍵因素之一。
　　目的：評價(jià)脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合纈沙坦治療急性心肌梗死的療效，探討其可能的機(jī)制為臨床用于治療心肌梗死提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　方法：
　　第一部分：酶消化法及貼壁法從大鼠肩胛骨兩側(cè)棕色脂肪中分離、培養(yǎng)擴(kuò)增ADMSCs，流式細(xì)胞儀鑒定第三代細(xì)胞表型，DAPI標(biāo)記備用。
　　

2、第二部分：成年雄性SD大鼠32只隨機(jī)均分為四組，每組8只，即A組(對照組，單純AMI組)，B組(ADMSCs移植組)，C組(纈沙坦組)，D組為聯(lián)合組(ADMSCs+纈沙坦組)。在呼吸機(jī)支持下，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，建立心肌梗死模型，各組死亡大鼠及時(shí)補(bǔ)充。B組(ADMSCs移植組)及D組(ADMSCs+纈沙坦組)給予每只大鼠ADMSCs為0.2ml(1×106/ml)，在梗死周圍選4點(diǎn)行微量注射器(50μl/點(diǎn)，于AMI后1h內(nèi))注射完成

3、，C組及D組中纈沙坦在AMI后即刻給予灌(30mg/kg/天，溶于5ml生理鹽水)治療，持續(xù)喂養(yǎng)4周。
　　第三部分：術(shù)后4周，測定血液中IL-1β，IL-6，和TNF-α表達(dá)，血流動(dòng)力學(xué)評價(jià)心臟功能變化，免疫組化測定a-actin表達(dá)，Masson三色染色法評價(jià)梗死區(qū)纖維化程度，TUNEL法測梗死邊緣區(qū)心肌細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　第一部分：顯微鏡下可見大量貼壁細(xì)胞，原代細(xì)胞多為圓形或者橢圓形，經(jīng)過3-4次傳代后，

4、形狀穩(wěn)定，多為梭形，三角形。流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面抗原顯示：CD31、CD34、CD45表達(dá)陰性；CD29及CD90表達(dá)陽性。證實(shí)從大鼠的脂肪中已經(jīng)成功分離、培養(yǎng)了ADSCs，并具有間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells，MSCs)的表型。
　　第二部分：心肌梗死模型建立及術(shù)后1周，因室顫死亡4只，2只死于呼吸衰竭，2只死于過度麻醉，其余術(shù)后生存良好。通過觀察結(jié)扎前降支動(dòng)脈心電圖V1-V5導(dǎo)聯(lián)ST-T在結(jié)扎后5分

5、鐘左右呈弓背向上抬高、左心室前壁顏色變白及HE染色可判別模型建立成功。結(jié)果表明結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支可建立缺血范圍相對固定的方式，是建立心肌梗死模型穩(wěn)定、可靠的方法。
　　第三部分：C組和D組血液中IL-1β、IL-6及TNF-α的表達(dá)下降，以ADMSCs和纈沙坦聯(lián)合組下降最明顯；ADMSCs和纈沙坦聯(lián)合組心功能和纖維化得到明顯改善，聯(lián)合組梗死邊緣心肌細(xì)胞凋亡程度明顯減輕。
　　結(jié)果：脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合纈沙坦可明顯改善心