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文檔簡介
1、背景:干細胞作為有潛力的治療急性心肌梗死的方式取得了一定進步,但仍面臨一系列挑戰(zhàn),其中心肌粳死后產(chǎn)生的炎癥反應是阻礙其療效發(fā)揮的關鍵因素之一。
目的:評價脂肪源性間充質干細胞聯(lián)合纈沙坦治療急性心肌梗死的療效,探討其可能的機制為臨床用于治療心肌梗死提供實驗證據(jù)。
方法:
第一部分:酶消化法及貼壁法從大鼠肩胛骨兩側棕色脂肪中分離、培養(yǎng)擴增ADMSCs,流式細胞儀鑒定第三代細胞表型,DAPI標記備用。
2、第二部分:成年雄性SD大鼠32只隨機均分為四組,每組8只,即A組(對照組,單純AMI組),B組(ADMSCs移植組),C組(纈沙坦組),D組為聯(lián)合組(ADMSCs+纈沙坦組)。在呼吸機支持下,結扎左冠狀動脈前降支,建立心肌梗死模型,各組死亡大鼠及時補充。B組(ADMSCs移植組)及D組(ADMSCs+纈沙坦組)給予每只大鼠ADMSCs為0.2ml(1×106/ml),在梗死周圍選4點行微量注射器(50μl/點,于AMI后1h內(nèi))注射完成
3、,C組及D組中纈沙坦在AMI后即刻給予灌(30mg/kg/天,溶于5ml生理鹽水)治療,持續(xù)喂養(yǎng)4周。
第三部分:術后4周,測定血液中IL-1β,IL-6,和TNF-α表達,血流動力學評價心臟功能變化,免疫組化測定a-actin表達,Masson三色染色法評價梗死區(qū)纖維化程度,TUNEL法測梗死邊緣區(qū)心肌細胞凋亡。
結果:
第一部分:顯微鏡下可見大量貼壁細胞,原代細胞多為圓形或者橢圓形,經(jīng)過3-4次傳代后,
4、形狀穩(wěn)定,多為梭形,三角形。流式細胞儀鑒定細胞表面抗原顯示:CD31、CD34、CD45表達陰性;CD29及CD90表達陽性。證實從大鼠的脂肪中已經(jīng)成功分離、培養(yǎng)了ADSCs,并具有間充質干細胞(mesenchymal stemcells,MSCs)的表型。
第二部分:心肌梗死模型建立及術后1周,因室顫死亡4只,2只死于呼吸衰竭,2只死于過度麻醉,其余術后生存良好。通過觀察結扎前降支動脈心電圖V1-V5導聯(lián)ST-T在結扎后5分
5、鐘左右呈弓背向上抬高、左心室前壁顏色變白及HE染色可判別模型建立成功。結果表明結扎左冠狀動脈前降支可建立缺血范圍相對固定的方式,是建立心肌梗死模型穩(wěn)定、可靠的方法。
第三部分:C組和D組血液中IL-1β、IL-6及TNF-α的表達下降,以ADMSCs和纈沙坦聯(lián)合組下降最明顯;ADMSCs和纈沙坦聯(lián)合組心功能和纖維化得到明顯改善,聯(lián)合組梗死邊緣心肌細胞凋亡程度明顯減輕。
結果:脂肪源性間充質干細胞聯(lián)合纈沙坦可明顯改善心
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