CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義和對喉癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:檢測CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平,分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,并探討在體外實(shí)驗(yàn)中以重組慢病毒為載體沉默CD47基因及抗CD47單克隆抗體(抗CD47單抗)對喉癌細(xì)胞Hep-2增殖、凋亡及侵襲等細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為喉癌的分子靶向治療提供理論依據(jù)。
  方法:1、用蛋白印記Western blot檢測CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織及癌旁正常喉上皮組織中的表達(dá)水平,并分析其與喉癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,證明其在喉癌中的意

2、義;2、構(gòu)建CD47干擾慢病毒載體,以構(gòu)建好的CD47-RNA干擾慢病毒載體(CD47-RNAi-LV)干擾喉癌細(xì)胞株Hep-2,設(shè)立正常對照組、陰性對照組、CD47-RNAi-LV1、CD47-RNAi-LV2、CD47-RNAi-LV3、CD47-RNAi-LV4轉(zhuǎn)染組,熒光顯微鏡下初步觀察轉(zhuǎn)染率,并運(yùn)用Western blot檢測轉(zhuǎn)染前、后Hep-2細(xì)胞中CD47蛋白的表達(dá),篩選出干擾效率最高的RNAi片段;3、采用MTT比色法、

3、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測RNA干擾及抗CD47單抗兩種方式對喉癌細(xì)胞Hep-2增殖、凋亡及侵襲能力的影響。
  結(jié)果:1、CD47蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平要明顯高于癌旁正常喉上皮組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤T分期、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而與患者的年齡和病理分化程度無顯著關(guān)系,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.0

4、5)。2、CD47-RNAi-LV能高效地轉(zhuǎn)入喉癌Hep-2細(xì)胞中,熒光顯微鏡下觀察其轉(zhuǎn)染率達(dá)90%以上,Western blot顯示轉(zhuǎn)染后Hep-2細(xì)胞中CD47蛋白表達(dá)抑制率可高達(dá)87.03%。3、MTT比色法結(jié)果顯示:干擾后第1-3天干擾組與正常對照組及陰性對照組對細(xì)胞生長抑制率無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05),抗CD47單抗組與其他各組比均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),第4-7天干擾組及抗CD47單抗組與對照組比有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0

5、.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測各組的凋亡率(%),分別為:正常對照組0.28±0.04,陰性對照組0.40±0.05,干擾組3.75±0.26,抗體組4.08±0.27,干擾組、抗體組分別與正常對照組及陰性對照組相比均具有顯著差異(p<0.01),干擾組與抗體組比無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示24h各組間細(xì)胞穿膜數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),48h、72h干擾組及抗體組細(xì)胞穿膜數(shù)量較正常對照組及陰性對照組均

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