納米粒子負載的阿霉素對MCF-7乳腺癌細胞的靶向殺傷及生物學意義.pdf

1、乳腺癌是嚴重危害女性健康的一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。作為蒽環(huán)類抗生素，阿霉素（DOX)是應用于乳腺癌化療藥物的代表之一。阿霉素屬于非周期類抑制類藥物，對處于不同細胞周期的腫瘤細胞均具有殺傷作用，但DOX缺乏對腫瘤細胞的特異性，會損傷正常細胞，產(chǎn)生嚴重的毒副作用，因此急需發(fā)展新型安全高效的乳腺癌治療方法。
　　納米材料具有低毒或無毒、生物可降解性、在體內(nèi)具有良好的生物相容性、以及對實體瘤的易穿透性和高滯留效應，

2、從而成為目前的研宄熱點，并有望成為新型的載藥系統(tǒng)。更為重要的是納米粒子表面可進行適當?shù)幕瘜W修飾，使其在負載藥物的同時能夠主動靶向腫瘤。因此可借助納米載藥系統(tǒng)來提高和改善化療藥物對腫瘤的治療效果。
　　本課題利用已研制成功的負載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)，研究其在體、內(nèi)外主動靶向腫瘤細胞和對腫瘤細胞特異性殺傷的特性與效果。
　　第一部分負載DOX的納米粒子對MCF-7乳腺癌細胞株殺傷及機制<

3、br>　　目的：研究負載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)體外對乳腺癌細胞MCF-7的靶向性及其對腫瘤細胞的抑制作用。
　　方法：通過流式細胞術(shù)檢測MCF-7細胞表面CD44分子的表達；利用流式細胞術(shù)以及激光共聚焦顯微鏡地觀察游離DOX(Free DOX)、DOX-NPs被細胞攝取的情況；將 Free DOX、DOX-NPs與細胞共育4 h后，通過CCK-8試劑盒檢測細胞增殖抑制情況，臺盼藍染色計數(shù)分析

4、細胞存活情況，通過劃痕實驗分析細胞迀移，使用Hoechst試劑盒檢測細胞凋亡。設置DOX-NPs攝取抑制實驗，以及用H A封閉MCF-7細胞表面CD44分子后，CCK-8試劑盒檢測DOX-NPs對細胞增殖的抑制情況。
　　結(jié)果：MCF-7細胞表面高表達CD44分子，DOX-NPs能夠被MCF-7細胞有效攝取。DOX-NPs對MCF-7的增殖、迀移具有顯著抑制作用，并明顯誘導MCF-7細胞發(fā)生凋亡。HA封閉細胞表面CD44分子后，D

5、OX-NPs被MCF-7細胞攝取受阻，且細胞增殖抑制能力下降。
　　結(jié)論：負載D O X的透明質(zhì)酸納米粒子DOX-NPs體外能被MCF-7細胞有效攝取，并對腫瘤細胞具有顯著的殺傷作用。
　　第二部分負載DOX的納米粒子對MCF-7荷瘤裸鼠的靶向殺傷及生物學意義
　　目的：研究負載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)在體內(nèi)的分布和富積情況以及體內(nèi)治療乳腺癌的效果。
　　方法：血液循環(huán)實驗研

6、宄DOX-NPs的藥物代謝動力學性質(zhì)；利用小動物成像系統(tǒng)檢測納米粒子在腫瘤組織的富積情況，并測定DOX-NPs在荷瘤裸鼠體內(nèi)代謝10 h后腫瘤組織和各器官中DOX的含量；使用裸鼠乳腺癌模型，研究DOX-NPs體內(nèi)治療效果；并通過H&E染色和TUNEL方法檢測其對組織學結(jié)構(gòu)的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)DOX-NPs有效地延長循環(huán)時間。
　　（2) DOX-NPs能夠主動富積到腫瘤部位，并減少在重要臟器的分布。