冰香散及其主要成分1,8-cineol防治流感實驗研究.pdf

1、流行性感冒主要是由流感病毒引起的、臨床中常見的急性呼吸道傳染病，多發(fā)生在春季。新出現(xiàn)的高致病性流感病毒具有高死亡率，同時具有較強的傳染性，這在季節(jié)性流感爆發(fā)和大面積流行期間，嚴重威脅人類健康。近年來，由于流感病毒抗原的變異，臨床中常用的抗流感病毒藥物出現(xiàn)不同程度的耐藥性和副作用，使得高致病性的禽流感在人類的傳播導致感染人數(shù)和死亡人數(shù)不斷增多。
　　流感病毒的感染途徑是通過飛沫傳播，侵襲呼吸道粘膜，在呼吸道黏膜進行病毒復(fù)制和釋放子病

2、毒。流感病毒感染人體之初，呼吸道粘膜上的流感病毒載量較低，在此阻斷流感病毒的侵襲是抑制流感病毒大量復(fù)制和釋放病毒粒，限制嚴重感染的有效手段。
　　接種有效的、安全的流感疫苗是預(yù)防流感和阻止流感大流行的主要手段。流感疫苗佐劑一直是疫苗研究領(lǐng)域的熱點問題。疫苗佐劑在誘導免疫反應(yīng)中的主要作用是提高機體免疫系統(tǒng)，提高抗原或者是免疫原的免疫應(yīng)答反應(yīng)。疫苗佐劑可以激活固有免疫反應(yīng)以及提高抗原對免疫系統(tǒng)的遞程和刺激作用，進而激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

3、
　　本次試驗通過冰香散揮發(fā)油滴鼻預(yù)防給藥，檢測流感病毒小鼠模型體內(nèi)免疫水平，探討冰香散揮發(fā)油抗流感病毒的免疫反應(yīng)機制。同時，使用冰香散揮發(fā)油主要成分1，8-cineol作為流感疫苗佐劑，聯(lián)合流感疫苗免疫小鼠，觀察對不同亞型的流感病毒的預(yù)防作用，以其深入揭示1，8-cineol的佐劑活性，為其作為流感疫苗佐劑運用提供新的思路。
　　目的:
　　通過冰香散揮發(fā)油滴鼻免疫，評價黏膜免疫對流感病毒感染鼠的治療作用。同時，觀察

4、冰香散揮發(fā)油主要成分之一的1，8-cineol對流感病毒引起的病毒性肺炎炎癥因子的變化情況;同時，1，8-cineol作為流感疫苗佐劑，聯(lián)合流感疫苗，通過黏膜免疫，觀察1，8-cineol聯(lián)合流感疫苗對不同亞型的流感病毒的預(yù)防作用，并探討其佐劑機制。
　　方法:
　　實驗一冰香散揮發(fā)油黏膜免疫抗流感病毒效果評價。
　　1.采用流感病毒模型小鼠評價冰香散黏膜免疫抗流感作用。
　　2.ELISA檢測感染鼠的肺泡灌洗液

5、和血清中的s-IgA、IgG，細胞因子IL-4、IFN-γ的表達。
　　3.免疫組化檢測鼻相關(guān)淋巴組織中CD4、CD8;
　　4.采用細胞增殖與活性試劑盒(CCK-8)脾淋巴細胞增殖情況。
　　實驗二1，8-cineol對流感流感病毒引起的病毒性肺炎炎癥因子的試驗研究
　　1.采用流感病毒模型小鼠評價1，8-cineol對病毒性肺炎的抑制作用。
　　2.ELISA檢測肺泡灌洗液中IL-6，TNF-α，IL-

6、1β和IFN-γ和鼻腔沖洗液中細胞因子MCP-1，IL-4，IL-5和IL-8水平。
　　3.采用實時熒光定量PCR技術(shù)，觀察流感病毒感染的小鼠模型中肺病毒載量的影響。
　　4.HE染色觀察感染小鼠肺部病理反應(yīng)。
　　5.采用WB檢測肺部蛋白NF-κB，(VCAM)-1，ICAM-1的表達。
　　實驗三1，8-cineol作為流感疫苗佐劑黏膜免疫對流感病毒的預(yù)防作用研究
　　1.采用流感病毒模型小鼠評價1，

7、8-cineol的黏膜佐劑作用。
　　2.采用實時熒光定量PCR技術(shù)，觀察流感病毒感染的小鼠肺部病毒載量的含量。
　　3.HE染色觀察感染小鼠肺部病理反應(yīng)。
　　4.ELISA檢測血清中s-IgA、IgG、IgG1b、IgG2a、IgG2b水平。
　　5.采用免疫組化檢測呼吸道IEL的表達。
　　6.采用流式細胞術(shù)檢測外周血中CD40，CD80，CD86，CD11c的表達。
　　結(jié)果:
　　1、

8、冰香散揮發(fā)油通過滴鼻給藥，能夠提高流感病毒感染鼠的肺泡灌洗液和血清中s-IgA水平，與安慰劑組相比，有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);能夠提高血清IgG含量，與安慰劑組相比，有統(tǒng)計學差異(p＜0.05);與病毒唑相比，冰香散揮發(fā)油能夠刺激CD4、CD8T細胞分化與成熟，能夠刺激脾淋巴細胞增殖，刺激細胞因子IFN-γ、IL-4分泌。冰香散揮發(fā)油主要成分之一的1，8-cineol能夠減輕流感病毒引起的病毒性肺炎的嚴重程度，有效提高感染小鼠的生存

9、時間，降低鼻腔沖洗液和肺泡沖洗液中的炎癥因子含量，抑制炎癥反應(yīng)中關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子NF-κB，與模型對照組相比，具有統(tǒng)計學差異（p＜0.05，p＜0.01）。
　　2、1，8-cineol聯(lián)合流感疫苗預(yù)防接種，能夠能降低感染鼠的肺指數(shù)，緩解流感病毒感染鼠的肺部病變程度，提高感染鼠的生存保護作用;提高血清中IgG，IgG1，IgG2a以及IgG2b的抗體水平，與單獨疫苗組相比，具有統(tǒng)計學差異（p＜0.05，p＜0.01）;1，8-cine

10、ol聯(lián)合流感疫苗，能夠有效誘導局部黏膜免疫反應(yīng)，提高肺泡灌洗液中s-IgA的含量，提高呼吸道內(nèi)皮上淋巴細胞IEL的表達，與單獨疫苗組相比，具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05，p＜0.01)。1，8-cineol聯(lián)合流感疫苗，能夠有效刺激樹突狀細胞的表達和成熟，促進共刺激信號的表達，與單獨疫苗組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05，p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　冰香散揮發(fā)油通過滴鼻給藥，能夠有效誘導流感病毒感染鼠的黏膜免疫反應(yīng)