潛陽育陰顆粒通過抑制炎性反應改善高血壓早期腎損害的基礎與臨床研究.pdf

1、一、目的
　　圍繞高血壓早期腎保護，開展基礎與臨床研究。通過觀察院內特色制劑潛陽育陰顆粒作用于人臍靜脈內皮細胞(HLVEC)損傷模型，明確該藥能否下調炎癥因子表達、減輕腎臟花生四烯酸(AA)代謝紊亂;通過該藥干預高血壓的臨床研究，證實該藥是否可以改善高血壓早期腎損害的相關指標;通過流行病學調查研究，尋找引起高血壓腎損害的危險因素，為中醫(yī)藥多因素干預高血壓早期腎損害提供進一步的證據。
　　二、方法及內容
　　（一）基礎研

2、究
　　潛陽育陰顆粒對HUVEC細胞損傷模型活性及相關蛋白表達的影響:將SD大鼠隨機分為正常組、纈沙坦膠囊組、潛陽育陰顆粒組、潛陽育陰顆粒聯合纈沙坦膠囊組，每組8只，灌胃給藥，其中潛陽育陰顆粒，劑量為10 g/kg/d，分2次給藥，纈沙坦膠囊每日1次給藥，劑量為0.027 g/kg/d，連續(xù)給藥7d，制備含藥血清。HUVEC分為5組，除正常組外，其余組均采用AngⅡ作用于對數生長期的HUVEC建立細胞損傷模型。造模后，分別給予相應

3、含藥血清干預:對照組（10％空白血清培養(yǎng)液）、模型組（10％空白血清培養(yǎng)液）、纈沙坦膠囊組（10％纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液）、潛陽育陰顆粒組（10％潛陽育陰顆粒血清培養(yǎng)液）、潛陽育陰顆粒聯合纈沙坦膠囊組（10％潛陽育陰顆粒+10％纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液），繼續(xù)培養(yǎng)24 h。觀察:①MTT法檢測含藥血清對AngⅡ誘導HUVEC損傷細胞活性的影響;②熒光顯微鏡觀察含藥血清對AngⅡ誘導HUVEC損傷細胞形態(tài)的影響;③含藥血清對AngⅡ誘導的HUV

4、EC損傷細胞活性氧生成的影響;④含藥血清對內皮細胞損傷模型NF-κB p65的影響;⑤含藥血清對內皮細胞損傷模型COX-1、COX-2的影響;⑥含藥血清對內皮細胞損傷模型PGES及PGIS的影響。
　　結果:①不同藥物的含藥血清干預后，結果顯示:與對照組相比，模型組HUVEC細胞存活率顯著降低(P＜0.01)，給予含藥血清干預后，各組細胞存活率與模型組相比顯著升高（P＜0.01），潛陽育陰顆粒與纈沙坦膠囊聯合用藥組較纈沙坦膠囊組的

5、活細胞數目更高(P＜0.01)。③與對照組相比，模型組細胞活性氧水平顯著升高(P＜0.01)。給予含藥血清后，各給藥組活性氧水平顯著降低(P＜0.01)，且聯合用藥組對HUVEC損傷細胞模型的活性氧水平降低最為顯著(P＜0.05)。④模型組細胞NF-κB p65蛋白表達的水平顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各給藥組NF-κB p65蛋白表達水平顯著降低（P＜0.01），聯合用藥組較纈沙坦膠囊組NF-κB p65蛋白表達水平降低明

6、顯(P＜0.05)。⑤各組間相比，COX-1蛋白表達水平無顯著差異(P＞0.05);與對照組相比，模型組細胞COX-2蛋白表達的水平顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各給藥組COX-2蛋白表達水平顯著降低(P＜0.01)，聯合用藥組COX-2蛋白表達水平降低更加明顯（P＜0.01）。⑥與模型組相比，各給藥組PGES及PGIS蛋白表達水平顯著降低（P＜0.01），其中，聯合用藥組較纈沙坦膠囊組降低PGIS的表達有統計學差異(P＜0.

7、01)。
　　結論:①潛陽育陰顆粒含藥血清可以提高AngⅡ誘導HUVEC損傷細胞的存活率，降低活性氧的水平;②潛陽育陰顆?？梢詼p少AngⅡ誘導損傷HUVEC細胞的炎性反應，機制可能與降低NF-κB p65、COX-2炎癥因子的表達有關。③潛陽育陰顆粒拮抗AngⅡ誘導損傷HUVEC細胞的機制可能與下調PGES及PGIS蛋白表達，從而可能減少致炎前列腺素的產生。④潛陽育陰顆粒和纈沙坦膠囊聯合用藥組保護HUVEC細胞損傷模型的作用強于單

8、純纈沙坦膠囊用藥組。
　?。ǘ┡R床研究
　　潛陽育陰顆粒干預高血壓早期腎損害的臨床研究:選擇符合年齡在35-75歲之間;原發(fā)性2或3級高血壓病;中醫(yī)肝火亢盛證或陰虛陽亢證;eGFR≥60ml/min/1.73m2，尿ACR正常;自愿參加試驗并簽署知情同意書的受試者，按照1∶1的比例隨機分為試驗組和對照組，試驗組采用潛陽育陰顆粒加西藥標準降壓治療(以ACEI或ARB為基礎治療，可以聯合CCB)，對照組采用上述單純西藥治療，觀

9、察周期為6個月，觀察指標為:兩組用藥前后尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR、NGAL、KIM-1、IL-18以及人口學資料、生命體征、生化指標等，采用SPSS20.0軟件進行統計分析兩組間比較，采用兩個獨立樣本均數T檢驗，組內比較采用配對T檢驗。
　　結果:①給藥前試驗組與對照組在人口學特點、生命體征、生化指標，尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR等數據兩組比較差異均無統計學意義，說明兩組基線均衡有可比性。②給藥觀察6個月后，兩組人口學

10、特點、生命體征、生化指標，尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR的組間比較差異無統計學意義。尿微量白蛋白指標的組內配對T檢驗結果顯示，試驗組(x)±sd為（9.578±25.871）mg/L，P值為0.017，前后比較差異有統計學意義（P＜0.05），對照組的(x)±sd為（9.318±65.629）mg/L，P值為0.352，前后比較差異無統計學意義（P＞0.05）。在改善NGAL方面，組間成組T檢驗比較結果顯示，試驗組入組前的(x)±sd

11、為（155.961±62.884）ng/ml，對照組入組前(x)±sd為（172.625±88.3733）ng/ml，兩組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，給藥6個月后，試驗組(x)±sd為（131.611±46.576）ng/ml，對照組(x)±sd為（158.180±61.502）ng/ml，兩組療后6個月組間比較P值為0.024，差異有統計學意義（P＜0.05）。組內配對T檢驗結果，試驗組NGAL(x)±sd為（22.5347

12、±56.391）ng/ml，前后比較P值為0.011，差異有統計學意義（P＜0.05），而對照組(x)±sd為（18.1929±79.2146）ng/ml，差異無統計學意義(P＞0.05)。IL-18、K1M-1組間及組內比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。
　　結論:潛陽育陰顆粒干預6個月后，可以改善高血壓患者早期腎臟損害指標NGAL的表達，同時有降低尿微量白蛋白的趨勢。
　?。ㄈ?流行病學調查研究
　　南京社

13、區(qū)人群高血壓腎損害危險因素調查研究:納入來源于南京秦淮區(qū)大光路社區(qū)衛(wèi)生中心門診體檢系統導出的2015年1月至2016年12月診斷為高血壓人群及健康人群數據，體檢資料完整。采用成組T檢驗，以eGFR＜90及≥90ml/min/1.73m2分兩組，分析Height、Weight、HR、SBP、ALT、AST、TBIL、BUN、TC、HDL-C、LDL-C、TG、血WBC、RBC、PLT、Hb，以及合并冠心病、糖尿病之間的差異;以eGFR為因

14、變量，以上述因素為自變量，采用多元線性回歸分析其相關性。
　　結果:①共納入符合方案要求的2697例人群數據，包括健康人群1309例，高血壓人群1388例，其中，單純高血壓660例，高血壓合并糖尿病297例，合并冠心病124例。②在健康人群或高血壓人群中，以eGFR水平分組，成組T檢驗比較結果顯示:男女之間的eGFR值均有極顯著的統計學差異(P＜0.001)，女性高于男性;eGFR值與BUN、UA之間呈極顯著的負相關(P＜0.00

15、1);與SBP呈顯著的負相關（P＜0.01）;與TBIL之間呈負相關(P＜0.05)。在1388例高血壓人群中分析顯示:eGFR與TG之間呈有極顯著的負相關(P＜0.001)，合并冠心病患者eGFR下降更為明顯(P＜0.001)。660例單純高血壓人群組分析顯示:eGFR與體重之間呈負相關(P＜0.01)。高血壓人群較健康人eGFR相比，呈極顯著的負相關(P＜0.001)。③線性多元回歸分析:eGFR與LDL-C、FBG、WBC、PP之