細(xì)粒棘球蚴Eg95表位短肽Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPⅢ融合蛋白誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答特點(diǎn)的研究.pdf

1、目的：本課題旨在研究細(xì)粒棘球蚴 Eg95表位短肽 Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白的潛在功能及對繼發(fā)性細(xì)粒棘球蚴感染小鼠的免疫保護(hù)作用及其機(jī)制，希望能為包蟲病的防治尋找到更有效的保護(hù)性抗原，為今后開展棘球蚴病的特異性疫苗免疫預(yù)防和免疫干預(yù)研究奠定基礎(chǔ)，對開拓包蟲病的防治新方法具有重要的理論價值和潛在的應(yīng)用前景。
　　方法：本課題組前期已經(jīng)通過生物信息學(xué)技術(shù)分析并獲得Eg95蛋白的T-B細(xì)胞聯(lián)合表位信息，

2、應(yīng)用噬菌體展示系統(tǒng)對預(yù)測得到的T-B聯(lián)合表位進(jìn)行鑒定和篩選，成功構(gòu)建出Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3原核表達(dá)載體，得到并純化Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白。
　　動物實(shí)驗(yàn)第一部分：將小鼠隨機(jī)分為4組，前三組分別將Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白與弗氏佐劑混勻免疫BALB/c小鼠，第4組為生理鹽水對照組，通過ELISA檢測0周、2周、4周、6周、8周、10周各組小鼠

3、體內(nèi)IgG和IgE水平，檢測0周、第10周脾淋巴細(xì)胞上清細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平，MTT法檢測第10周脾淋巴細(xì)胞增殖;動物實(shí)驗(yàn)第二部分：將小鼠隨機(jī)分為4組，分別將Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白與弗氏佐劑混勻免疫BALB/c小鼠,第4組為生理鹽水對照組，在第8周用細(xì)粒棘球蚴原頭蚴腹腔攻擊感染，并通過 ELISA檢測未免疫、免疫后、免疫并攻擊感染后（0周、8周、10周、

4、32周）各組小鼠體內(nèi)IgG和IgE水平及細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平，CCK法檢測第32周脾淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)果：成功表達(dá)和純化了Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白。動物實(shí)驗(yàn)第一部分：細(xì)粒棘球蚴Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白免疫小鼠后，隨著免疫次數(shù)的增加和時間的延長，從第4周開始小鼠體內(nèi)IgG和IgE水平均逐漸升高，IgE在第8周達(dá)到高峰，然后呈

5、下降趨勢，但與0周相比仍有統(tǒng)計學(xué)意義。Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組脾淋巴細(xì)胞被Eg95抗原刺激后上清細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平在第10周明顯比0周高，生理鹽水對照組脾淋巴細(xì)胞在Eg95抗原刺激下細(xì)胞因子均則無明顯變化。Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組和生理鹽水對照組的小鼠脾淋巴細(xì)胞在體外均能被 ConA刺激誘導(dǎo)發(fā)生增殖，且Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3

6、組也能被Eg95抗原刺激誘導(dǎo)發(fā)生增殖，且第10周時，三組實(shí)驗(yàn)組均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　動物實(shí)驗(yàn)第二部分：Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組的IgG和IgE以及IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平在第8周、第10周、第32周與第0周比較均增高，具有統(tǒng)計學(xué)意義。Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組的IL-2、TNF-α和IFN-γ均在第10W達(dá)高峰，在第32W逐漸下降，但仍高于其組第0W水平

7、，具有統(tǒng)計學(xué)意義。生理鹽水對照組IL-2、TNF-α和IFN-γ水平在第10W達(dá)高峰，在第32W逐漸下降，與0W相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組和生理鹽水對照組的IL-4和IL-10均呈增長趨勢，在第8周、第10周、32周均有統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)Eg95抗原刺激后，Eg95-1組、Eg95-2組、Eg95-3組及生理鹽水對照組脾淋巴細(xì)胞均發(fā)生顯著增殖，與無刺激物相比具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：細(xì)粒棘

8、球蚴Eg95表位短肽Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白免疫小鼠后可誘導(dǎo)以IgG為主的體液免疫應(yīng)答。細(xì)粒棘球蚴Eg95表位短肽Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白免疫小鼠后能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。細(xì)粒棘球蚴Eg95表位短肽Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3的rPIII融合蛋白能誘導(dǎo)繼發(fā)性細(xì)粒棘球蚴感染小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的保護(hù)力，可通過體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮免疫保護(hù)作用。細(xì)