全腦照射對大鼠海馬區(qū)Notch1信號通路的影響.pdf

1、目的:
　　1、建立SD大鼠放射性腦損傷模型，觀察大鼠全腦照射后海馬區(qū)成熟神經(jīng)元及新生神經(jīng)元的數(shù)目及結(jié)構(gòu)變化。
　　2、檢測大鼠全腦照射后海馬區(qū)Notch1信號通路中Notch1、下游因子Hes1、Hes5，以及上游配體Jag1的表達變化。
　　方法:
　　將動物隨機分為假照射組（con組）、模型組（Mod組），通過對成年雌性SD大鼠予單次10Gy全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型，顏面部、頸部、軀干及四肢用鉛塊遮擋。

2、假照射組同樣予10Gy照射，鉛塊遮擋全身。模型組依據(jù)照射后處死時間分為1d組、3d組、1w組、2w組、1m組、2m組。分別在對應(yīng)時間點處死大鼠并獲取海馬組織，其中，用于免疫組織化學(xué)方法及電子顯微鏡觀察的海馬組織，經(jīng)多聚甲醛心臟灌注固定標(biāo)本;而用于Real-time PCR及Western blot檢測的海馬組織，液氮保存，備用。從con組、2w組、1m組及2m組各組中分別隨機抽取6只SD大鼠，采用免疫組織化學(xué)染色法Neun抗體標(biāo)記成熟神

3、經(jīng)元細胞核，以檢測海馬CA1區(qū)及DG區(qū)的成熟神經(jīng)元，高倍視野下計數(shù);通過DCX抗體標(biāo)記海馬顆粒下層(SGZ)中的新生神經(jīng)細胞，計數(shù)海馬區(qū)總的新生神經(jīng)元數(shù)目變化。另從con組、2w組、1m組及2m組各組中再分別隨機抽取3只大鼠海馬組織，電子顯微鏡觀察神經(jīng)元內(nèi)部結(jié)構(gòu)的改變。從con組、1d組、3d組、1w組、2w組、1m組及2m組各組中分別抽取6只SD大鼠，采用Real-TimePCR法和Western Blot法檢測海馬組織中Notch1

4、、Hes1、Hes5及Jag1的mRNA以及蛋白質(zhì)的表達變化。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠放射性腦損傷模型的建立:成年雌性SD大鼠共使用82只，成功造模并存活至設(shè)定時間點的共78只。
　　2、電鏡觀察模型大鼠海馬區(qū)結(jié)構(gòu):假照射組神經(jīng)元內(nèi)結(jié)構(gòu)正常。而在全腦10Gy照射后2周組的海馬切片中，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常，細胞部分線粒體輕度水腫，脂褐素和溶酶體增多;照射1月組內(nèi)，神經(jīng)元細胞核輕度水腫，異染色質(zhì)邊集，多數(shù)線粒體空泡變性。照

5、射2月組細胞結(jié)構(gòu)基本同1月組。
　　3、模型大鼠海馬CA1及DG區(qū)內(nèi)成熟神經(jīng)元計數(shù):相較假照射組，大鼠全腦10Gy照射2周后，海馬CA1區(qū)及DG區(qū)成熟神經(jīng)元數(shù)目未見明顯改變，照射1月及2月后成熟神經(jīng)元數(shù)目明顯下降。
　　4、海馬SVZ區(qū)新生神經(jīng)元計數(shù):較假照射組，大鼠全腦10Gy照射2w組成熟神經(jīng)元數(shù)目未見明顯減少，而在照射后1m、2m組中，新生神經(jīng)元數(shù)目明顯減少。
　　5、海馬區(qū)Notch1信號通路的表達:大鼠全腦1

6、0Gy照射后，海馬區(qū)Notch1表達進行性下調(diào);其上游配體Jag1在照射后2w內(nèi)表達無明顯變化，而在照射1m、2m后表達顯著下調(diào)（P＜0.05）。下游因子Hes1變化趨勢同Jag1相似，在照射1m后開始出現(xiàn)顯著下調(diào)。下游因子Hes5在照射后各時間點均未見明顯上調(diào)或下調(diào)改變。
　　結(jié)論:
　　大鼠全腦10Gy照射后，海馬區(qū)神經(jīng)元內(nèi)部結(jié)構(gòu)隨著時間發(fā)生變化，神經(jīng)元數(shù)目也隨之減少，海馬CA1區(qū)、DG區(qū)呈現(xiàn)相似改變，提示大鼠海馬CA1