生物樣品中富馬酸喹硫平測(cè)定的現(xiàn)代分析方法比較研究.pdf

1、精神分裂癥(Schizophrenia)是臨床上最為常見(jiàn)的一種精神類(lèi)疾病，該病產(chǎn)生的機(jī)制暫不明確，且病程較長(zhǎng)、多反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重困擾著現(xiàn)代人的工作和生活。非典型抗精神病藥物富馬酸喹硫平(QF)因其療效顯著、副作用少且能與多種藥物聯(lián)合用藥等特點(diǎn)，已成為治療各類(lèi)精神分裂癥的一線(xiàn)藥物。隨著藥物制劑學(xué)等學(xué)科的發(fā)展和相關(guān)核心技術(shù)的突破，QF緩釋制劑應(yīng)運(yùn)而生，且廣泛應(yīng)用于臨床。本課題以QF為研究對(duì)象，分別采用HPLC-QqQ-MS/MS、HPLC-T

2、OF-MS和FESI-CZE-PDA這三種發(fā)展迅速的現(xiàn)代體內(nèi)藥物分析方法，對(duì)分別口服給藥QXR（自研緩釋片）200 mg/犬、QXR（原研緩釋片）200 mg/犬和QIR（原研普通片）200 mg/犬后Beagle犬體內(nèi)QF的臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行研究，并對(duì)合肥醫(yī)工醫(yī)藥有限公司自行研制的QF緩釋片的生物等效性進(jìn)行考察，最后比較評(píng)價(jià)這三種分析方法在生物樣品測(cè)定方面的異同，以期為以后實(shí)驗(yàn)中的生物樣品測(cè)定方法選擇提供依據(jù)。
　

3、　本論文可分為以下三部分：
　　一、富馬酸喹硫平HPLC-QqQ-MS/MS定量分析方法的建立及其自研緩釋片在Beagle犬體內(nèi)的生物等效性研究
　　本章建立了一個(gè)生物樣品體內(nèi)分析最為常用的HPLC-QqQ-MS/MS法測(cè)定Beagle犬血漿樣品中喹硫平的含量。采用Dikma Diamonsil C18（5μm，100 mm×4.6 mm）色譜柱，0.1％甲酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相，流速為1 mL/min，分流比為3∶7，梯度

4、洗脫，藥物和內(nèi)標(biāo)在3.0～3.5 min之間出峰，且峰型對(duì)稱(chēng)無(wú)拖尾，單針?lè)治鰰r(shí)間為5.5 min。生物樣品前處理采用甲醇(1∶3)沉淀蛋白法，其中所含的內(nèi)源性物質(zhì)均不干擾QTP和內(nèi)標(biāo)的測(cè)定。方法學(xué)驗(yàn)證合格。將該方法應(yīng)用于Beagle犬體內(nèi)QXR（自研緩釋片）的生物等效性研究，綜合單多劑量給藥測(cè)定結(jié)果，可以看出:QXR（自研緩釋片）與QXR(原研緩釋片)在6條Beagle犬體內(nèi)的主要藥代動(dòng)力學(xué)特性tmax、 Cmax、 AUC0～24、F

5、0～24(％)基本一致;而QXR（自研緩釋片）與QIR（原研普通片）的tmaxCmax、AUC0～24、F0～24(％)均存在顯著性差異。每天給藥一次的多劑量試驗(yàn)，從第五天開(kāi)始，Beagle犬體內(nèi)喹硫平的血藥濃度大體上不再變化，達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。三種制劑在Beagle犬體內(nèi)的多劑量試驗(yàn)結(jié)果顯示，喹硫平并未在其體內(nèi)產(chǎn)生蓄積。
　　二、富馬酸喹硫平HPLC-TOF-MS定量分析方法的建立及其在Beagle犬體內(nèi)的臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究

6、>　　本章將HPLC與有高分辨率、高精度、線(xiàn)性范圍寬和能夠快速分析等優(yōu)勢(shì)的飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)器聯(lián)用，建立了一個(gè)準(zhǔn)確測(cè)定Beagle犬血漿中QTP含量的HPLC-TOF-MS法。采用Agilent C18（3.5μm，100 mm×3.0 mm）色譜柱，以甲醇∶0.1％甲酸水=60∶40低流速(0.3 mL/min)方式等度洗脫，QTP和內(nèi)標(biāo)存3 min內(nèi)即可出峰。前處理方法同“HPLC-QqQ-MS/MS法”，測(cè)定無(wú)干擾且無(wú)殘留現(xiàn)象發(fā)生。

7、對(duì)該方法進(jìn)行的方法學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果均符合FDA關(guān)于體內(nèi)藥物分析的有關(guān)要求。本章應(yīng)用此HPLC-TOF-MS法對(duì)QXR（原研緩釋片）和QIR（原研普通片）在Beagle犬體內(nèi)的臨床前藥動(dòng)學(xué)特性進(jìn)行了研究。
　　三、富馬酸喹硫平FESI-CZE-PDA定量分析方法的建立及其在Beagle犬體內(nèi)的臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　本章建立了一個(gè)能夠?qū)︵蚱竭M(jìn)行準(zhǔn)確定量的高靈敏度FESI-CZE-PDA方法:以50 mM NaH2PO4-H3PO

8、4(pH2.5)緩沖液為運(yùn)行Buffer，運(yùn)行電壓為13 kV，電動(dòng)進(jìn)樣5kV×10s，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。應(yīng)用CE的有機(jī)溶劑在線(xiàn)堆積場(chǎng)放大技術(shù)，選擇65％的乙腈水溶液為樣品溶劑將QTP的檢測(cè)靈敏度提高了40-50倍，避免了PDA檢測(cè)器靈敏度低的問(wèn)題;同時(shí)采用液液萃取前處理進(jìn)一步濃縮樣品，將QTP測(cè)定的定量下限優(yōu)化至1 ng/mL;為了節(jié)約前處理時(shí)間，使用96孔板對(duì)樣品進(jìn)行批量前處理，達(dá)到了快速高通量分析的目的。對(duì)本法進(jìn)行的方法學(xué)評(píng)