黃酮類化合物和B族維生素對(duì)溶菌酶二級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性影響的光譜學(xué)研究.pdf

1、溶菌酶可以溶解細(xì)菌細(xì)胞壁，它最早被英國(guó)細(xì)菌學(xué)家弗萊明在人體的唾液、眼淚等分泌物中發(fā)現(xiàn)，具有抗菌消炎、抗病毒等多種藥理作用。黃酮類化合物是一種具有抗菌作用的天然有機(jī)化合物，該作用被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥中。溶菌酶和黃酮類化合物均具有抗菌作用且在機(jī)體中都不易產(chǎn)生耐藥性，但各自單獨(dú)使用時(shí)抗菌能力較弱，因此探討它們是否可以聯(lián)合使用對(duì)于尋求新的抗菌途徑具有重要理論意義。B族維生素可能具有協(xié)助溶菌酶抗菌的作用，研究 B族維生素對(duì)藥物與溶菌酶結(jié)構(gòu)影響，進(jìn)而推

2、測(cè)對(duì)溶菌酶生物活性和功能的影響，為臨床抗菌藥物的聯(lián)合使用提供理論參考依據(jù)。
　　目的：研究黃酮類化合物對(duì)溶菌酶二級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性的影響，并探討了B族維生素存在下，黃酮-溶菌酶體系中溶菌酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化。
　　方法：運(yùn)用圓二色光譜法(CD)、拉曼光譜法（LTRS）推測(cè)黃酮類化合物對(duì)溶菌酶α-螺旋結(jié)構(gòu)的影響；運(yùn)用衰減全反射傅里葉變換紅外光譜（ATR-FTIR）定量地驗(yàn)證溶菌酶α-螺旋相對(duì)百分含量的變化，并且結(jié)合圓二色光譜和拉曼光

3、譜法推測(cè)溶菌酶活性位點(diǎn)的變化情況；運(yùn)用紫外-可見光譜法按照溶菌酶試劑盒說明書測(cè)定溶菌酶活性，驗(yàn)證溶菌酶活性位點(diǎn)的變化情況。通過ATR-FTIR法考察B族維生素對(duì)溶菌酶與藥物作用后二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，推測(cè)溶菌酶活性位點(diǎn)以及生物功能的變化情況。
　　結(jié)果：圓二色光譜和拉曼光譜法表明木犀草素、木犀草苷、黃芩素、黃芩苷、漢黃芩素、槲皮素、槲皮苷和山奈素八種黃酮類化合物加入后溶菌酶吸收峰的位移和峰強(qiáng)發(fā)生改變；ATR-FTIR光譜法表明溶菌酶與八

4、種黃酮類成分作用后，溶菌酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)相對(duì)百分含量發(fā)生改變。溶菌酶α-螺旋相對(duì)百分含量在木犀草素、木犀草苷、黃芩苷、漢黃芩素、槲皮素和山奈素加入前后有顯著性差異；溶菌酶活性試劑盒實(shí)驗(yàn)表明，八種黃酮類成分加入均使溶菌酶活性降低，其中木犀草素、木犀草苷、黃芩苷、漢黃芩素、槲皮素和山奈素加入前后，溶菌酶活性變化顯著；ATR-FTIR光譜法研究B族維生素在黃酮類化合物存在下對(duì)溶菌酶二級(jí)結(jié)構(gòu)相對(duì)百分含量的影響表明，當(dāng)木犀草素、槲皮苷和維生素B1、B

5、3，黃芩苷、山奈素、槲皮素和維生素B1、B3、B5同時(shí)存在以及木犀草苷和維生素B1，漢黃芩素和維生素B3同時(shí)存在下，溶菌酶的α-螺旋相對(duì)百分含量有顯著改變；而黃芩素和維生素B1、B3、B5同時(shí)加入前后，溶菌酶α-螺旋平均相對(duì)百分含量無顯著變化。
　　結(jié)論：通過圓二色光譜和拉曼光譜法推測(cè)八種黃酮類化合物加入會(huì)對(duì)溶菌酶的α-螺旋結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響；通過ATR-FTIR光譜法表明八種黃酮類化合物皆可以改變?nèi)芫付?jí)結(jié)構(gòu)，其中木犀草素、木犀草苷

6、、黃芩苷、漢黃芩素、槲皮素和山奈素加入前后會(huì)對(duì)溶菌酶α-螺旋結(jié)構(gòu)產(chǎn)生顯著性影響，進(jìn)而推測(cè)溶菌酶活性位點(diǎn)在加入上述六種黃酮類化合物后會(huì)受到顯著影響；溶菌酶活性試劑盒實(shí)驗(yàn)表明八種黃酮類化合物的加入都會(huì)對(duì)溶菌酶活性產(chǎn)生一定影響，其中木犀草素、木犀草苷、黃芩苷、漢黃芩素、槲皮素和山奈素六種黃酮類化合物加入后對(duì)溶菌酶活性有顯著影響，驗(yàn)證ATR-FTIR光譜法關(guān)于溶菌酶活性位點(diǎn)變化的推測(cè)。ATR-FTIR光譜法研究B族維生素對(duì)溶菌酶-黃酮體系中溶菌