旋轉(zhuǎn)手法對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響.pdf

1、背景:
　　頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊是由于脂肪、血栓、結(jié)締組織和碳酸鈣在頸動(dòng)脈沉積所造成的一種對(duì)人體有害的狀態(tài)，是一種多種危險(xiǎn)因素所致的進(jìn)行性動(dòng)脈血管疾病病理表現(xiàn)，常會(huì)因局部缺血而引發(fā)腦梗死等嚴(yán)重后果。隨著生活水平的提高，高脂血癥、高血壓、糖尿病、吸煙、肥胖與日俱增，尤其以中老年居多，而這些都是目前認(rèn)為引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化疾病的重要危險(xiǎn)因素。與此同時(shí)，中老年患者也是頸部疾患的高發(fā)人群，常見(jiàn)的包括頸椎病、頸椎間盤(pán)突出癥、頸椎關(guān)節(jié)紊亂等。鑒于手

2、法治療對(duì)緩解頸部疼痛或不適的顯著療效，以及患者對(duì)口服藥物的副作用的顧慮，該人群患者往往會(huì)將頸椎旋轉(zhuǎn)手法等物理治療方式作為首選。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在美國(guó)每年約有8百萬(wàn)人因頸部疼痛求醫(yī)，而其中1百萬(wàn)人會(huì)選擇推拿治療，但接踵而至的，一方面是對(duì)手法療效的認(rèn)可，另一方面卻是關(guān)于手法治療不當(dāng)造成頸部疾患不良事件報(bào)道。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，1995年美國(guó)因頸部推拿造成腦血管損傷的事故占全部推拿事故的6.2％。這些層出不窮的不良事件（包括缺血性腦卒中、腦梗死等）以及其高

3、致死率不可避免的引起了相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜液团R床醫(yī)生的高度重視，頸部推拿手法對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化疾病患者的影響也隨之成為學(xué)科界專(zhuān)家關(guān)注的焦點(diǎn)之一。頸動(dòng)脈粥樣硬化頸動(dòng)脈斑塊所致官腔狹窄、血流動(dòng)力學(xué)改變及斑塊脫落形成栓子是引起腦缺血的主要機(jī)制。其中，大部分缺血性腦卒中及腦梗死的患者與頸動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)。動(dòng)脈斑塊按病理變化可分為兩類(lèi):穩(wěn)定性斑塊和不穩(wěn)定型斑塊，后者較前者更易脫落，形成血栓，引發(fā)腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高，故頸部手法對(duì)不穩(wěn)定性動(dòng)脈粥樣硬

4、化斑塊的影響也無(wú)疑成為當(dāng)前相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。然而，頸動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)進(jìn)行性的疾病，隨著病情的進(jìn)展及各種因素的刺激，穩(wěn)定性斑塊有可能向不穩(wěn)定性動(dòng)脈斑塊發(fā)展。那么，頸部手法是否會(huì)是刺激穩(wěn)定性斑塊向不穩(wěn)定性斑塊發(fā)展的重要因素是本研究要解釋的關(guān)鍵問(wèn)題。
　　目的:
　　本研究主要包括兩個(gè)方面:1、通過(guò)測(cè)量頸部旋轉(zhuǎn)手法和推橋弓法作用后的頸動(dòng)脈斑塊的破裂壓力值與對(duì)照組的相比較，以研究頸部推拿手法是否會(huì)造成斑塊物理結(jié)構(gòu)改變，使其穩(wěn)定性

5、降低;2、通過(guò)對(duì)比三組（普通飼料喂養(yǎng)組、頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、高脂飼料喂養(yǎng)B組）實(shí)驗(yàn)兔的頸動(dòng)脈硬化斑塊的微區(qū)拉曼光譜，以研究穩(wěn)定性動(dòng)脈斑塊的拉曼光譜特點(diǎn)以及頸部推拿手法是否會(huì)改變斑塊脂質(zhì)成分而影響動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性。
　　方法:
　　1、兔穩(wěn)定性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型建立及分組:
　　選購(gòu)普通級(jí)健康純種雄性成年新西蘭兔40只，以普通飼料喂養(yǎng)15天后，將實(shí)驗(yàn)兔分為兩大組，其中隨機(jī)選取10只作為普通飼料喂養(yǎng)組，繼續(xù)以普通飼料喂養(yǎng)至1

6、8周。剩余30只作為高脂飼料喂養(yǎng)A組，改用高脂肪飼料喂養(yǎng)至14周。14周后，再將高脂飼料喂養(yǎng)A組的30只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為3個(gè)小組，分別是:頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂肪飼料喂養(yǎng)B組，并繼續(xù)以高脂飼料喂養(yǎng)至18周。最后，納入手法干預(yù)及結(jié)果分析的實(shí)驗(yàn)兔被分為四個(gè)小組:普通飼料喂養(yǎng)組、頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂肪飼料喂養(yǎng)B組。
　　2、兔穩(wěn)定性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型評(píng)估
　　第一、兔血脂代謝的檢測(cè)
　　分別于6周、10周、

7、14周每次從高脂飼料喂養(yǎng)A組的實(shí)驗(yàn)兔中隨機(jī)選取8只兔進(jìn)行血液生化檢驗(yàn)。于抽血前1天下午，給待抽血的家兔禁食，次日清晨（空腹大于12h）從兔耳緣靜脈采集血液2.5mL。將其注入含有抗凝劑的普通試管中，靜置1h后，將試管置于離心機(jī)中進(jìn)行離心10min，速度為1500r/min。抽取上層血清，送至南方醫(yī)院檢驗(yàn)科，全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清中三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(HDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)

8、含量。
　　第二、病理學(xué)觀察
　　分別于6周、10周、14周從高脂飼料喂養(yǎng)A組的實(shí)驗(yàn)兔中隨機(jī)選取1只處死，取頸動(dòng)脈全長(zhǎng)，縱行切開(kāi)，將其置于4％的甲醛溶液中固定，逐級(jí)脫水，透明，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，觀察病理變化。
　　第三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　采用SPSS13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)兔的一般情況及血脂生化檢驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組數(shù)據(jù)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05為顯著性差異。<

9、br>　　3、手法干預(yù)
　　于14周時(shí)分別對(duì)頸椎旋轉(zhuǎn)手法組和推橋弓組的實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行相應(yīng)的手法干預(yù)。頸椎旋轉(zhuǎn)手法組將兔子頸部左右各旋轉(zhuǎn)1次（手法以將兔子頸部旋轉(zhuǎn)至極限即止），1次/3天，共15天，共5次;推橋弓組沿著左右頸動(dòng)脈各推20次，1次/天，共15天，共15次。
　　4、頸部推拿手法對(duì)兔頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊體外穩(wěn)定性分析
　　第一、分析裝置
　　1個(gè)壓力記錄裝置(SMC PRESSURE，ZSE30-01-65M

10、)，1個(gè)150ml注射器，1個(gè)三通管，3根壓力傳輸管，1根7號(hào)針頭，1對(duì)9V電池和1對(duì)電池夾。利用三通管和壓力傳輸管分別將注射器、壓力記錄裝置、7號(hào)針頭連接起來(lái)。電池夾與壓力記錄裝置電源線(xiàn)相連，正負(fù)極分別與電池正負(fù)極相連。通過(guò)注射器逐步加壓，將壓力通過(guò)壓力傳輸通道末端的針頭傳遞到斑塊內(nèi)，通過(guò)壓力記錄裝置記錄斑塊破裂時(shí)出現(xiàn)的最大壓力值。
　　第二、兔頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊體外穩(wěn)定性分析
　　分別在三組頸動(dòng)脈中取肉眼觀察向管腔內(nèi)突起

11、明顯的新鮮斑塊各8處，與血管外膜與管壁成大約30°方向進(jìn)針，根據(jù)進(jìn)針時(shí)的阻力變化和肉眼觀察，判斷針頭是否進(jìn)入斑塊部位內(nèi)膜下，在確定針尖進(jìn)入斑塊內(nèi)膜后，以15ml/s勻速推動(dòng)注射器以加壓，記錄斑塊破裂時(shí)的壓力值。
　　第三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用SPSS13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以雙側(cè)α=0.05為顯著性差異。
　　

12、5、頸椎旋轉(zhuǎn)手法對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化區(qū)拉曼光譜特征的影響
　　第一、樣本處理
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，游離頸動(dòng)脈，縱行切開(kāi)，再將動(dòng)脈放入PBS(pH7.4)溶液中，于-80℃冰箱保存，以備拉曼光譜測(cè)定。
　　第二、拉曼光譜檢測(cè)
　　檢測(cè)前解凍標(biāo)本，于取出的兩組動(dòng)脈（頸椎旋轉(zhuǎn)手法組和高脂飼料喂養(yǎng)B組）中各選出6處具有較明顯的斑塊的動(dòng)脈，普通飼料喂養(yǎng)組隨機(jī)選6條，生理鹽水洗凈，以633nm的激發(fā)作為激發(fā)光源，激光器輸出功

13、率:10.4mw，光斑直徑:1μm;各物質(zhì)光譜的拉曼位移范圍旋轉(zhuǎn)為1100～1900cm-1，信號(hào)被收集并校正，信號(hào)收集時(shí)間為15～60s。
　　第三、特征峰相對(duì)強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用以零點(diǎn)為基數(shù)，運(yùn)用Origin6.0軟件算出每個(gè)特征峰（1450cm-1及1660cm-1處）信號(hào)的相對(duì)強(qiáng)度。計(jì)量資料運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)頸椎旋轉(zhuǎn)手法和高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，數(shù)據(jù)以x±S表示，兩兩之間的比較采

14、用T檢驗(yàn)。以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡數(shù)量
　　納入雄性成年新西蘭兔40只，喂養(yǎng)過(guò)程中死亡10只。其中，高脂飼料喂養(yǎng)A組中的30只實(shí)驗(yàn)兔中死亡5只。普通飼料喂養(yǎng)組的10只實(shí)驗(yàn)兔死亡5只。實(shí)驗(yàn)造模過(guò)程中，總存活率66.7％。最終納入分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析的兔總計(jì)30只。
　　2、頸動(dòng)脈粥樣硬化兔血脂水平變化
　　6周、10周、14周時(shí)，高脂飼料喂養(yǎng)A組30只實(shí)驗(yàn)兔血清總膽固醇(T

15、C)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)水平呈逐步升高，高密度脂蛋白(HDL)水平呈逐步降低，各項(xiàng)指標(biāo)兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3、病理觀察結(jié)果
　　第6周，頸動(dòng)脈病理切片示:內(nèi)膜完整而光滑，中膜平滑肌走行清晰，無(wú)增生;第10周，頸動(dòng)脈病理切片示:動(dòng)脈內(nèi)皮受損增生，凸向管腔，有泡沫細(xì)胞形成;第14周，頸動(dòng)脈病理切片示:可見(jiàn)明顯泡沫細(xì)胞聚集，管腔可見(jiàn)明顯紅色血栓生成，符合動(dòng)

16、脈粥樣硬化早期穩(wěn)定性動(dòng)脈斑塊病變特點(diǎn)。
　　4、破裂壓力檢測(cè)結(jié)果
　　在壓力作用下斑塊發(fā)生破裂，肉眼可見(jiàn)加壓時(shí)斑塊部位發(fā)生凸起，持續(xù)加壓至一定值時(shí)凸起消失，同時(shí)壓力表所示壓力值降低，記錄斑塊破裂瞬間所示的最大壓力值。頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂飼料喂養(yǎng)B組之間均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　5、旋轉(zhuǎn)手法組與高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜檢測(cè)
　　第一、旋轉(zhuǎn)手法組與對(duì)照組的拉曼光譜檢測(cè)
　　普通飼料喂養(yǎng)組

17、的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處未見(jiàn)明顯脂質(zhì)特征峰;頸椎旋轉(zhuǎn)手法組的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處可見(jiàn)明顯脂質(zhì)特征峰;高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處可見(jiàn)明顯脂質(zhì)特征峰。
　　第二、特征峰相對(duì)強(qiáng)度測(cè)量的結(jié)果
　　讀取頸椎旋轉(zhuǎn)手法組與高脂飼料喂養(yǎng)B組的譜線(xiàn)，將拉曼峰值和對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)（相對(duì)強(qiáng)度）用SPSS13.0軟件進(jìn)行T驗(yàn)，兩組標(biāo)本在1450，1660n