小鼠著床前胚胎miR-125a,miR-295和miR-181b表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、微小RNA是一類(lèi)單鏈非編碼RNA,大約20-25個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度,在線蟲(chóng)到人類(lèi)的真核生物中廣泛存在。miRNA具有高度的保守性、組織特異性和時(shí)序性;生成miRNA的基因并不是隨機(jī)分布的,從同一個(gè)前體RNA加工而來(lái)的共表達(dá)miRNA存在基因簇集現(xiàn)象。成熟的miRNA通過(guò)其5’端的5-8個(gè)核苷酸,識(shí)別并與目標(biāo)特異性基因進(jìn)行不完全互補(bǔ)配對(duì)或者完全互補(bǔ)配對(duì),引起目標(biāo)特異性基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的降解或者誘導(dǎo)翻譯抑制,從而來(lái)調(diào)控目的基因的表達(dá)。miRNA通

2、過(guò)上述的作用原理在基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,并且還在對(duì)生物體的個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞增值、凋亡、分化以及腫瘤的發(fā)生等許多方面的研究上具有重要的意義。本課題開(kāi)展miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠著床前胚胎表達(dá)的研究,分析miRNA在著床前胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化等方面可能起到的作用。
　　目的:建立小鼠的超排、交配和胚胎收集系統(tǒng),研究miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠著

3、床前胚胎的表達(dá),探討miRNA在著床前胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化中的作用和意義。
　　方法:采用miRNA特異RT引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,采用SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠著床前胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:著床前胚胎發(fā)育的各階段均表達(dá)miR-125a、miR-295和miR-181b;隨著胚胎的發(fā)育,miR-295的表達(dá)呈逐漸上升的趨勢(shì);miR-125a在卵