磁性微球的制備及其在基因組脫氧核糖核酸提取上的應(yīng)用.pdf

1、隨著生命科學(xué)和生物工程的快速發(fā)展,磁分離技術(shù)以其簡便而快速的分離應(yīng)用,適于多樣化的樣品基質(zhì),易自動(dòng)化和微型化的特性正成為生命科學(xué)領(lǐng)域不可缺少的手段. 本文以本實(shí)驗(yàn)室采用模板法和化學(xué)共沉淀法制備的三種不同基質(zhì)類型的磁性微球和硅膠為吸附劑,聚乙二醇(PEG)和氯化鈉(NaCl)組成的吸附液,研究了小牛胸腺脫氧核糖核酸(DNA)在基于硅醇基的固相載體上的吸附行為.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,吸附液組成為20﹪(w/v)PEG和2.0 mol/L

2、NaCl和洗脫時(shí)間為10 min的條件下,DNA的回收率可達(dá)80﹪.磁性微球的提取效率與硅膠相仿,但是由于省去了離心分離步驟,縮短了核酸模板制備時(shí)間,有利于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作. 為了研究DNA在磁性微球上的吸附機(jī)理,我們進(jìn)一步研究了從PEG和NaCl組成的吸附液中,DNA被吸附至固相載體上的吸附等溫線,研究中發(fā)現(xiàn),DNA的吸附可用弗侖德里希吸附模型加以描述,相關(guān)系數(shù)均可達(dá)0.994以上. 采用研磨法粉碎哺乳動(dòng)物組織小牛胸

3、腺和植物組織玉米仁,經(jīng)細(xì)胞裂解液破細(xì)胞后,以硅醇基表面的磁性微球?yàn)楣滔噍d體,進(jìn)行基因組DNA磁分離提取,得到了片段約20 kb,A260/A2so大于1.77的高純度DNA. 將磁性微球用于野生釀酒酵母菌基因組.DNA的提取.采用兩種不同的方法部分和完全裂解釀酒酵母細(xì)胞壁,獲得了片段分別為5 kb和20 kb左右,且A260/A2so在1.77-1.89之間的DNA片段. 對(duì)所制備的磁性微球用硅烷化試劑表面改性后,將