罕見弱表達(dá)D-變異體的遺傳背景分析和家系調(diào)查.pdf

1、Rh血型系統(tǒng)是所有血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的血型系統(tǒng)，包含了50多種抗原，在胎母免疫和新生兒胎兒溶血病(HDFN)中，是最具臨床價(jià)值的血型系統(tǒng)。RHD、RHCE基因編碼決定了Rh血型抗原。
　　D--變異體是Rh血型系統(tǒng)中一種非常罕見的Rh基因變異型，其紅細(xì)胞膜上只有D抗原，而C、c、E、e均不能正常表達(dá)。
　　本文對(duì)D--變異體綜合進(jìn)行RHD、RHAG、RHCE基因、血清學(xué)以及家系分析。
　　目的:
　　研究D--變異

2、體的分子遺傳背景，以期能夠發(fā)現(xiàn)新的Rh血型變異體發(fā)生機(jī)制，同時(shí)初步探索了中國(guó)人RHAG血型系統(tǒng)中RHAG高頻抗原，以及RhD、RhCE抗原表達(dá)的影響因素。
　　方法:
　　1.研究對(duì)象
　　實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)源于甘肅省血液中心的1個(gè)D--個(gè)體樣本及家系成員（其弟弟，父親，母親），所有實(shí)驗(yàn)樣本均是經(jīng)過(guò)血液中心法定檢測(cè)項(xiàng)目的合格血液。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　(1)血清學(xué)Rh表型檢測(cè):分別用鹽水試管法、微柱凝膠卡法和間接

3、抗人球蛋白試驗(yàn)鑒定D--個(gè)體樣本及家系成員RhD、C、c、E和e抗原。
　　(2)序列特異性PCR法(PCR-SSP)檢測(cè)RHCE基因:設(shè)計(jì)4對(duì)序列特異性引物，根據(jù)體系內(nèi)擴(kuò)增產(chǎn)物的有或無(wú)來(lái)判斷RHCE基因型。
　　(3)測(cè)序:依據(jù)RHD、RHAG、RHCE基因序列的特異性，分別擴(kuò)增這3個(gè)基因的10個(gè)外顯子，確認(rèn)產(chǎn)物條帶符合后將擴(kuò)增產(chǎn)物送公司純化測(cè)序，測(cè)序序列與標(biāo)準(zhǔn)基因序列進(jìn)行比對(duì)。
　　(4)RHD合子型分析:采用雙管

4、PCR方法擴(kuò)增融合Rh盒子和RHD基因第一外顯子，通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶一次性判斷3種RHD合子型。
　　(5)家系分析:通過(guò)RHCE基因測(cè)序結(jié)果結(jié)合RHD合子型分析繪制D--個(gè)體的家系譜圖。
　　結(jié)果:
　　1.血清學(xué)測(cè)定個(gè)例為弱D--表型;
　　2.RHCE基因測(cè)定結(jié)果為DC-表型;
　　3.RHD、RHAG基因編碼區(qū)第1-10外顯子測(cè)序，結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列一致。RHAG基因未觀察到形成Oldeide和Ducl

5、os-Like抗原的堿基變異，亦未見形成高頻抗原Duclos的RHAG316C＞G突變，所有序列均未見雜合峰;
　　4.RHCE基因編碼區(qū)第1-10外顯子測(cè)序，發(fā)現(xiàn)該個(gè)例第3-5外顯子缺失，其它外顯子正常，第1-2外顯子為RHC基因型，確定個(gè)體攜帶RHCE(e)-D(3-5)-CE(e)等位基因，因此血清學(xué)檢測(cè)為D--表型，而基因檢測(cè)為DC-表型;
　　5.先證者父母和其弟的RHAG、RHD基因編碼區(qū)序列與先證者完全一致，父

6、母Rh血清學(xué)表型分別為DCCee和DccEE，父親的PCR-SSP和測(cè)序結(jié)果一致，母親PCR-SSP結(jié)果DCcEE與測(cè)序結(jié)果一致，而與血清學(xué)結(jié)果不符(DccEE)，弟弟血清學(xué)表型、PCR-SSP和測(cè)序結(jié)果均與先證者一致。結(jié)合RHD合子型分析結(jié)果，該家系父母分別為DCe/DC-和DcE/DC-基因型，先證者和兄弟為DC-/DC-。
　　結(jié)論:
　　1.RHCE(e)-D(3-5)-CE(e)等位基因形成D--表型并穩(wěn)定遺傳;<