長(zhǎng)春花重要生物堿含量測(cè)定及相關(guān)基因的表達(dá)分析.pdf

1、生物堿是植物天然次生代謝產(chǎn)物中數(shù)量最多的一類含氮堿性化合物。許多生物堿由于具有特殊的藥理學(xué)活性已引起人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。藥用植物長(zhǎng)春花中含有長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿等重要的抗腫瘤萜類吲哚生物堿（TIAs）。但這些TIAs在天然長(zhǎng)春花植株中含量較低，化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜使其人工合成十分困難，因此，僅從天然長(zhǎng)春花植物中提取TIAs不能滿足市場(chǎng)需求，其價(jià)格較為昂貴。近年來(lái)，關(guān)于長(zhǎng)春花生物堿代謝途徑的研究取得了很多成果，為利用植物基因工程提高長(zhǎng)春花中藥用生物堿

2、的含量提供了理論依據(jù)。本研究利用RP-HPLC技術(shù)對(duì)采集到的25個(gè)長(zhǎng)春花品種葉片中的文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿和長(zhǎng)春堿含量進(jìn)行了測(cè)定，并分析了3種生物堿含量之間的關(guān)系，為長(zhǎng)春花生物堿代謝工程提供了材料選擇的依據(jù)。另外通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)研究了tdc，g10h，str，dat4個(gè)長(zhǎng)春花生物堿代謝途徑中的重要基因在長(zhǎng)春花品種間的表達(dá)差異，分析了基因表達(dá)水平與生物堿含量的關(guān)系。主要研究?jī)?nèi)容如下： ⑴優(yōu)化改進(jìn)了RP-HPLC測(cè)定長(zhǎng)春花中生物堿含量

3、的方法，能一次完成長(zhǎng)春花中3種的重要生物堿（文多靈，長(zhǎng)春質(zhì)堿和長(zhǎng)春堿）的測(cè)定。 ⑵獲得了25個(gè)長(zhǎng)春花品種中的文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿和長(zhǎng)春堿含量的數(shù)據(jù)，分析了長(zhǎng)春堿含量與文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿含量的關(guān)系。結(jié)果表明，文多靈含量與長(zhǎng)春堿含量的相關(guān)性比長(zhǎng)春質(zhì)堿含量與長(zhǎng)春堿含量的相關(guān)性更好。 ⑶通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了長(zhǎng)春花生物堿代謝途徑中4個(gè)關(guān)鍵基因的表達(dá)水平，分析比較了基因表達(dá)與TIAs含量之間的關(guān)系。得出了香葉醇10-脫羧酶基因g10h，