西瓜枯萎病菌侵染西瓜根系的組織病理學觀察及致病相關基因Fove1的功能研究.pdf

1、由尖孢鐮孢菌西瓜?；鸵鸬奈鞴峡菸∈俏鞴仙a上危害最嚴重的病害之一。為進一步研究其致病機理，本研究以西瓜枯萎病菌FO1022為受體菌株，優(yōu)化了其原生質體的制備條件，通過PEG介導進行了hph和gus基因的共轉化，并對轉化子的生物學特性以及轉化子中gus基因表達活性進行了研究。結果表明:以0.8 mol/L的NaC1為滲透壓穩(wěn)定劑，10 mg/mL溶壁酶酶解3小時可以釋放出2.48×108個/mL原生質體，兩個基因共轉入受體菌株的效率

2、為40％以上。對轉化子進行gus基因PCR檢測和活性表達檢測表明該基因已轉進西瓜枯萎病菌基因組中，并能在轉化菌株中表達。在PDA培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)7代后，所有轉化子仍能穩(wěn)定表達gus活性。接種西瓜植株后，通過染色觀察可以清晰的觀察到轉化子對不同抗性水平西瓜品種的侵染差異。
　　利用蘸根接種法鑒定西瓜枯萎病菌FO1022生理小種類型，并用綠色熒光蛋白(GFP)基因標記該菌株，觀察病原菌侵染西瓜根莖系的組織學過程。結果表明，該菌株為西瓜

3、枯萎病菌生理小種1號。用GFP標記的病菌接種感病西瓜品種‘蘇蜜1號’，接種后2天，顯微觀察顯示病原菌的分生孢子附著于西瓜根系表皮細胞并萌發(fā)，沿細胞間層定殖生長;接種后5天，在西瓜根部維管束導管中觀察到大量菌絲和大型分生孢子，在根部表皮細胞上觀察到大量厚垣孢子，在莖部部分維管束導管中也觀察到少量的菌絲，此時48.6％的幼苗表現萎蔫癥狀;接種后9天，莖部所有維管束導管都充斥著密集的菌絲體，此時91.7％的幼苗表現枯萎和死亡。與侵染感病品種相

4、比，該菌株在侵染中抗品種和高抗品種時，在侵染時間上要明顯滯后。
　　利用融合PCR制備Fove1基因的同源重組片段，通過PEG介導的原生質體轉化法將Fove1基因的同源重組片段轉入西瓜枯萎病菌FO1022菌株中，得到Fove1基因的敲除突變體△Fove1和回復突變體△Fove1+Fove1，通過對FO1022、△Fove1和△Fove1+Fove1三個菌株進行菌落、菌絲和分生孢子形態(tài)以及致病力與次生代謝產物產量進行比較研究了Fov