白菜同核異質(zhì)雄性不育系與其保持系生物學(xué)差異比較及相關(guān)差異表達(dá)基因克隆.pdf

1、浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文白菜同核異質(zhì)雄性不育系與其保持系生物學(xué)差異比較及相關(guān)差異表達(dá)基因克隆姓名：向珣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：曹家樹20080112摘要受同核異質(zhì)的影響但趨勢(shì)一致。將差異片段回收、克隆、測(cè)序，獲得9個(gè)eDNA差異片段，在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源序列比對(duì)和功能預(yù)測(cè)。(5)運(yùn)用eDNAoAFLP篩選得到G早、中期花蕾提早表達(dá)的MYB1ike差異片段，利用RACE克隆得到該片段的eDNA全長(zhǎng)，

2、命名為BcMYBogu(GenBank登錄號(hào)：EFl27861)，對(duì)其氨基酸序列和表達(dá)特征進(jìn)行研究。結(jié)果表tlJ]BcMYBogu具有典型的MYBDNA結(jié)合域—w殘基和SH[AL】QKY[RF】基序；系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示BcMYBogu與AtMYB26AtMYB32和AtMYB4等聚類在同一分支；RTPCR分析表明BcMYBogu在蓮座葉、花莖和花蕾中均有表達(dá)，但在G花蕾中表達(dá)量顯著上升。B的類黃酮含量隨著花蕾的發(fā)育而增加，而G早期花蕾類黃

3、酮含量較B低，且隨花蕾的發(fā)育呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，RTPCR分析表明，花蕾中參與調(diào)控苯丙烷代謝途徑9個(gè)關(guān)鍵酶(尉￡2，OMTl、4CL3，CHS，F(xiàn)3H，丹W、FLSl，DFR，ANS)的表達(dá)模式發(fā)生變化，由此推測(cè)BcMYBogu是一個(gè)新的與白菜OguraCMS相關(guān)的IvlYB家族新成員，白色花藥可能與絨氈層細(xì)胞苯丙烷代謝途徑有關(guān)。(6)采用cDNAAFLP分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)在B早期花蕾不表達(dá)但在G花蕾中穩(wěn)定表達(dá)的差異片段。利用RACE技術(shù)獲得其e

4、DNA全長(zhǎng)，命名為BcBHLHogu(GenBank登錄號(hào)：EFl27860)。該基因編碼122個(gè)氨基酸，具有basichelix100phelix(bHLH)結(jié)構(gòu)域；進(jìn)化分析表明，BcBHLHogu與AtBHLH060同源性最高，是冗余基因AtBHLHs060／048的直系同源基因，其功能與BEEsl／2／3(三個(gè)BR信號(hào)的早期應(yīng)答冗余基因)相似。同時(shí)G雄蕊花絲顯著變短、雌蕊變長(zhǎng)、花藥不開裂，花蕾發(fā)育過程中G的JA含量顯著低于B，由此

5、推導(dǎo)BcBHLHogu是白菜bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族的一個(gè)新成員，涉及到花器官發(fā)育信號(hào)事件，其功能與BR應(yīng)答有關(guān)。(7)利用cDNAAFLP分析獲得在P晚期花蕾中特異表達(dá)的差異片段pA9T4。該片段與甘藍(lán)BoTMT2高度同源。擴(kuò)增得其cDNA和基因全長(zhǎng)，命名為BcTMTp(GenBank登錄號(hào)：EFl27862)，編碼227個(gè)氨基酸，推測(cè)其分子量為2517kDa。BcTMTp含有典型的轉(zhuǎn)甲基酶motifI、Ⅱ和III，含有7個(gè)內(nèi)含子和8個(gè)外

6、顯子。內(nèi)源激素測(cè)定結(jié)果表明，P中到晚期花蕾的發(fā)育過程中，LAA含量呈顯著的上升趨勢(shì)；P花蕾JA含量極低，且中到晚期花蕾JA含量呈下降趨勢(shì)，IAAIJA的比值也存在差異。由此推定，BcTMTp的表達(dá)可能與P花蕾中JA和IAA兩種激素信號(hào)的互作有關(guān)。是否如此，尚待進(jìn)一步研究確認(rèn)。關(guān)鍵詞：白菜：Brassicacampestris；Arapa；同核異質(zhì)；CMS：花蕾：激素；苯丙烷代謝；小孢子發(fā)生；差異表達(dá)；cDNAAFLP：基因；克??；特征分