螺旋藻種質(zhì)與形態(tài)重建的分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文螺旋藻種質(zhì)與形態(tài)重建的分子遺傳學(xué)研究姓名：李晉楠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物物理學(xué)指導(dǎo)教師：凌備備2002.5.1卡那霉素、氯霉素及鏈霉素的抗性表現(xiàn)較為一致。對(duì)卡那霉素的抗性均為極強(qiáng)；對(duì)鏈霉素的抗性較小，IC，。為564—760ug／ml；對(duì)氯霉素的抗性最小，IC”為131215ug／ml。(2)10株鈍頂螺旋藻對(duì)青霉素和沽霉素的抗性，因螺旋藻藻株的不同有較大差異。其中sp—z和sps對(duì)青霉素的抗性較強(qiáng)；SpC其次；

2、Sp—D、SpD(L)、Sp—Z(SL)的生長雖受到青霉素的明顯抑制，但未能完全致死；spJ、spJfLl、Sp。B、SpF1可被全部致死，因此它們對(duì)青霉素的敏感性最強(qiáng)，抗性最小。同時(shí)，Sp—D、SpJ、sp—z和Sp—c4個(gè)藻株對(duì)潔霉素抗性較強(qiáng)，而其余6個(gè)藻株則對(duì)潔霉素的作用較為敏感。(3)sp—D、sp_J及sp—z3株正常形態(tài)的鈍頂螺旋藻品系與其形態(tài)變異(或突變)藻絲體Sp—D(L)、SpJ(L)及Sp—Z(SL)對(duì)潔霉素的抗性存

3、在差異，該差異可能與其形態(tài)變異有關(guān)。3養(yǎng)殖環(huán)境下變直螺旋藻回復(fù)正常形態(tài)的發(fā)現(xiàn)及形態(tài)變異相關(guān)蛋白的研究首次發(fā)現(xiàn)在養(yǎng)殖環(huán)境下鈍頂螺旋藻sp—M藻株的變直藻絲體Sp—M(L)可以回變?yōu)檎Ｂ菪螒B(tài)藻絲體Sp—M(L—H)，且生長速率和細(xì)胞組成等可幾乎完全回變。采用含SDS的緩沖液提取蛋白，以20％、30％、40％及80％(v／v)丙酮分級(jí)沉淀，對(duì)sp—M、SpM(L)和回變藻絲體Sp—M(L—H)不同蛋白級(jí)分進(jìn)行梯度凝膠電泳分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3

4、種材料以20％、30％、40％丙酮沉淀的蛋白級(jí)分電泳圖譜均相同；在80％(v／v)丙酮沉淀的蛋白級(jí)分中，sp—M與SpM(LH)兩種螺旋形藻絲體都存在分子量為537kD的一條蛋白帶，而直線形藻絲體SpM(L)則缺失此帶，表明此537kD蛋白與螺旋藻的形態(tài)變異相關(guān)。4轉(zhuǎn)座子調(diào)控螺旋藻形態(tài)重建的分子遺傳學(xué)研究根據(jù)螺旋藻中已知的轉(zhuǎn)座子分別設(shè)計(jì)合成上游及下游各一組半套式引物，通過對(duì)半套式引物有效性、隨機(jī)引物和半套式引物的退火溫度與反應(yīng)濃度以及有

5、效半套式引物組合與隨機(jī)引物的篩選試驗(yàn)，建立了可特異性擴(kuò)增轉(zhuǎn)座子在基因組上位點(diǎn)旁側(cè)序列的unevenPCR分析技術(shù)。用篩選出的有效的隨機(jī)引物$53與半套式引物組合Pu2／Pu3／Pu4、S89與Pd一1／Pd一2／Pd4配對(duì)，從spM的基因組DNAl|J分別擴(kuò)增出了已知轉(zhuǎn)座子的上游和下游目的片段(SpM—u和SpM—d)。測序結(jié)果表明。SpM—u為513bp，其中306bp與轉(zhuǎn)座子的5’端重合；Sp—Md為58lbp，其LJ88bp與轉(zhuǎn)座