鸚鵡熱嗜衣原體包涵體膜蛋白CPSIT_0846抗感染免疫保護作用.pdf

1、[目的]研究鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophilapsittaci，Cps)包涵體膜蛋白（Inclusion membrane proteins，Incs) CPSIT—0846的抗感染保護作用，為研制新型、有效和特異的Cps亞單位疫苗奠定基礎。
　　[方法]:將Cps6BC經(jīng)鼻感染BALB/c小鼠，設置5X104、5X105、5 X106IFU三個劑量組，建立小鼠呼吸道感染模型。將CPSIT.0846蛋白編碼基因，經(jīng)原核表達

2、、HIS樹脂純化后獲得重組蛋白。將CPSIT_0846重組蛋白經(jīng)腹腔注射途徑免疫小鼠，末次免疫后15d，ELISA法檢測免疫小鼠血清中特異性IgA、IgG及 IgG亞類；檢測小鼠脾細胞培養(yǎng)上清中的IFN-丫、IL-6等細胞因子產(chǎn)生水平；并經(jīng)呼吸道感染Cp6BC，比較免疫組與非免疫組小鼠發(fā)病情況、存活率及肺組織病變程度，評價CPSIT_0846的免疫保護作用。
　　[結果]1.5X104、5X105、5X106IFUCps6BC經(jīng)呼

3、吸道感染BALB/c小鼠，小鼠出現(xiàn)不同程度的臨床癥狀及臟器器官的病理改變，并呈明顯的劑量依賴關系。根據(jù)臨床癥狀、存活率及組織病變程度等指標，確定5X105 IFU為最佳感染劑量。2.將重組蛋白經(jīng)腹腔注射途徑免疫三次后，小鼠血清中產(chǎn)生高效價的特異性IgG與IgA抗體，其中總IgG效價為1：48000，IgG1為1:10400，IgG2a為1:3000，IgG2b1:16000，IgG31:10400，Ig A為1:400，均明顯高于對照組

4、（尸<0.01)。3.檢測各組小鼠脾細胞上清中細胞因子，結果顯示，在脾細胞上清中檢測到了高濃度的IFN-Y和IL-6，CPSIT—0846免疫組的IFN-丫含量為544.97±80.93 pg/mL,PBS組25.86±12.54 pg/mL、卵清蛋白組32.29±12.77pg/mL，CPSIT—0846組 IFN-丫水平與PBS組和卵清蛋白組比較差異有統(tǒng)計學意義（尸<0.01)；免疫組IL-6含量334.25±34.47 pg/mL

5、，PBS組和卵清蛋白組含量分別為27.07±7.55 pg/mL和30.20±7.17 pg/mL，CPSIT—0846組IL-6含量明顯高于對照組(尸<0.01)。CPSIT—0846免疫組的脾淋巴細胞剌激指數(shù)（S I)為2.27，明顯高于PBS組和卵清蛋白組剌激指數(shù)(P<0.01)。4. CPSIT—0846蛋白免疫組小鼠經(jīng)Cps呼吸道感染10d后，肺部組織病理改變較輕，而對照組沒有明顯保護作用。
　　[結論]1.建立了Cps