第一部分 人類多巴胺應(yīng)答基因-1，DRG-1功能的初步鑒定;第二部分 人類基因LASS2與其酵母同源基因LAG1的功能互補(bǔ)研究.pdf

1、Y955150援縱學(xué)博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10246學(xué)弓：021023062人類多巴胺應(yīng)答基因1，DRGJ功能的初步鑒定Functionalcharacterizationofhumandopamineresponsivegene1，DRG一1人類基因LASS2與其酵母同源基因LAGl的功能互補(bǔ)研究FunctionalcomplementationbetweenhumangeneLASS2anditsyeasthomologueLAGl

2、系(所)：遣佳堂煎蜜逝專業(yè)：遺佳堂姓名：一金蠢。攻讀學(xué)位：——擅圭導(dǎo)師：一：奎直田教援指導(dǎo)老師：昌紅副教援完成日期：2Q煎生!!旦!Q目■●●●●復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文摘要人類多巴胺應(yīng)答基因1，DRGj在2002年被克隆到。在多巴胺刺激后，DRG1在大鼠星狀膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)發(fā)生上調(diào)。但是它的具體功能仍然未知。在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)DRG1是一個在后生動物中保守的基因，而且在同源基因的啟動子區(qū)域都含有一個NFKB的結(jié)合位點(diǎn)。組織表達(dá)譜的研究表

3、明，DRG1在人的肝，腎，胰腺和脾臟中的表達(dá)量較高。在酵母雙雜交的篩選中，DRG1可以與p75NTR介導(dǎo)的細(xì)胞死亡的執(zhí)行蛋白(NADE)相結(jié)合。該結(jié)合在體內(nèi)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)和體外GSTpulldown實(shí)驗(yàn)中都得到了驗(yàn)證，而且DRG1和NADE共定位于293和PCI2細(xì)胞的胞漿中。系列缺失實(shí)驗(yàn)表明兩者之間的結(jié)合是通過DRG1的N端1150氨基酸和NADE的C端59111氨基酸區(qū)域來介導(dǎo)的。在MIT細(xì)胞增殖測試中，穩(wěn)定表達(dá)的DRG—J可以促進(jìn)

4、293細(xì)胞的增殖。而過量表達(dá)NADE可以抑制DRG1所促進(jìn)的細(xì)胞生長。上述結(jié)果為通過多巴胺刺激上調(diào)DRGJ表達(dá)的機(jī)制提供了解釋，并且暗示DRG1參與了多巴胺受體誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，而這種增殖可以被NADE負(fù)調(diào)控。關(guān)鍵詞：DRG1，NADE，多巴胺，增殖AbstractHumandopamineresponsivegene一1(DRG—j)wasclonedin2002Itsexpressionlevelcanbeupregulatedint

5、heratastrocytestreatedwithdopamineHowever，itsfunctionsalenotclearuptonowInthisstudyDRG一1wasidentifiedtobeaconservedgeneinmetazoansandshareNF—KBbindingsiteswithitshomologuesintheirpromotersDRG—Jwashighlyexpressedinhumanli

6、verMdney’pancreasandspleenInyeasttwohybridscreen，DRG一1wasshowntobindwithp75m—associatedcelldeathexecutor(NADE)TheinteractionwasfurtherverifiedbothbyCO—immunoprecipitationassayinvitroandGSTpulldownassayinvivoFurthermore，D

7、RG一1andNADEwereCO—localizedinthecytoplasmof293andPCI2cellsTheregionsresponsibleforinteractionweresubsequentlymappedtothe1150aminoacidofDRG一1atN—terminaland59111aminoacidofNADEatCterminalNoticeablystableexpressionofDRG一1i