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文檔簡介
1、本報告以人乳鐵蛋白(hLF)轉(zhuǎn)基因小鼠研究為主要內(nèi)容,對BAC大片段轉(zhuǎn)基因進行了研究.對147KB的BAC大段進行提取、酶切、純化處理,得到具有70KB 5'端側(cè)翼序列,35KB3'端側(cè)翼序列的完整人乳鐵蛋白序列.通過顯微注射,得到11只陽性人乳鐵蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠.其中五只母鼠Western blotting檢測呈陽性.經(jīng)放射性免疫測定,重組人乳鐵蛋白(rhLF)的表達量在400mg/l至7.8g/l之間.對所獲得的rhLF的糖基化程度的
2、研究表明,rhLF和hLF經(jīng)非減性(non-reducing)變性緩沖液變性后,Western雜交所顯示的帶型有顯著差異(P<0.01).經(jīng)N-glycosidase F去糖基化后,rhLF和hLF得到了大小一致的帶型.這表明,rhLF和hLF在糖基化程度上有著明顯差異.這種差異有可能導(dǎo)致rhLF和hLF在某些功能上的差異,這是在通過轉(zhuǎn)基因手段大規(guī)模生產(chǎn)rhLF時應(yīng)考慮到的方面.該研究的最終目的在于,把小鼠作為下一步實驗的模式動物,為在
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