應(yīng)用RP-HPLC技術(shù)對(duì)昆蟲細(xì)胞-桿狀病毒表達(dá)人生長(zhǎng)激素的純化和性質(zhì)鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、該實(shí)驗(yàn)運(yùn)用離子交換色譜,疏水相互作用色譜和反相高效液相色譜對(duì)昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Sf9-AcNPV)表達(dá)的重組人生長(zhǎng)激素(recombinant human Growth Hormone,rhGH)進(jìn)行了純化.含有rhGH的昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)離心超濾濃縮后,以離了交換色譜(CM-52)和疏水相互作用色譜(Phenyl-Sepharose CL-4B)粗提純,有效的去除了雜蛋白,并使rhGH大大濃縮富集.RP-HPLC中,采用Krom

2、asil C18色譜柱,正丙醇-磷酸鉀緩沖液梯度洗脫系統(tǒng),在35.5﹪正丙醇梯度下,得到有效分離的rhGH.借鑒國(guó)外最新報(bào)道的累加進(jìn)樣分離法,在分析型RP-HPLC儀上,得到高純度的rhGH.經(jīng)酶聯(lián)免疫分析,放射免疫分析,和Western雜交法分析,證明純化的rhGH與天然的人生激素有相同的免疫活性;經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳測(cè)定其分子量為21,500道爾頓;等電點(diǎn)聚焦法測(cè)定其等電點(diǎn)為4.9;經(jīng)丹磺酰氯法測(cè)定其N-末端為苯丙氨酸(Phe

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