鵝副粘病毒HN及F基因在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鵝副粘病毒HN及F基因在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)姓名：藏玉婷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王君偉20070620BaculovirusexpressionoftheHNandFgenesofGPMVAbstractGooseParamyxovirus(GPMV)ishomologouswithNewcastlediseasevims(NDV、atagreatsignificance，GPMVwas

2、revealedtobeavariantofNDVbutnotanewvirusOnestrainofNDVinfectwaterfowlandthevirulencewasenhancedHoweverGPMVwasnotabsolutelydifferentwithNDVhemagglutininneuraminidase(HN)andfusionpmtein(F)proteinweremutantandresultintheinv

3、alidationoftraditionalvaccineTherefore，thestudyonthevirusatmoleculardegreewasofgreatsignificanceHNandFproteinsweretheprimarytargetantigensofhumoralimmuneresponseagainstvirusHNandFproteinshavebecomethepreferredgenesforpro

4、ductionofgeneticallyengineeringvaccineandpathogendiagnosisInthisresearch，onesetofprimerswasdesignedbasedonthesequenceofHNandFgeneofGPMVofGenBankandthesequenceofeukaryotictransfervectorpBlueBachis2Ausingprimer50HNandFgene

5、wasamplifiedfrompMDl8THNandpMDl8TFrespectivelyanddesignatedaspMDl8TGPMVHNandpMDl8TGPMVFTheywereligatedintothetransfervectorpBlueBachis2AwithXholandEcoRIrestrictionsitesandtherecombinantplasmidsweredesignatedaspBlueGPMVHN

6、andpBlueGPMVECotransfectionofSf9insectcellwasperformedusingpurifiedrecombinantplasmidsandBacmidN—blueDNARecombiantvirusnamedP1wasrecovered4daftertransfectionAfter3serialpassgesofplaqueassayscreenfollowedbyPCRconfirmation

7、，therecombinantvin_lsweredesignatedasrBvHNandrBvEAfter3passagesofpropagationoftherecombinantvirus，hightitervirusnamedP3wasusedtoinoculateSf9cellsfollowedbyharvestafter4dTheFandFINproteinswereconfirmedtobe60kuand66kuinlen

8、gthwhichwereconsistentwiththespeulatedsizeasjudgedbySDSPAGEseperationHNproteincouldbespecificallyrecognizedbychickenantiGPMVantibodiesasinvestigatedbyWesternblotandDotELISAassaysAlltheresultsprovedthebetterreactionogenic

9、ityofHNproteinInthisresearch，HNandFproteinsofGPMV／JS／1／97／GostrainwereexpressedwithbaculovirusexpressionsystemTheexpressionoftheantigenicsitesofIINproteinwasconfirmedTheresultsofthisstudyprovideddataforfundamentalresearc

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