3D打印多孔復(fù)合支架的生物相容性研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 后續(xù)支架上的種子細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：
　　從 SD大鼠體內(nèi)成功分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），并檢測(cè)細(xì)胞多向分化的能力以及其表面上的相應(yīng) CD分子表達(dá)，為后續(xù)的支架上種子細(xì)胞提供明確的研究背景。
　　方法：
　　1.利用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　2.將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨，成脂兩個(gè)方向的分化誘導(dǎo)。
　　3

2、.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMSCs表面的相應(yīng)CD分子表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.在體外進(jìn)行分離培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)主要為梭形，排列似放射狀。
　　2.成骨分化的茜素紅染色，堿性磷酸酶ALP染色雙陽(yáng)性；成脂分化的油紅O染色陽(yáng)性。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD44和CD90雙陽(yáng)性率高達(dá)93.9％。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)?zāi)転楹罄m(xù)支架上的種子細(xì)胞提供明確的研究背景。
　　第二

3、部分 3D多孔復(fù)合支架的制備及其生物相容性檢測(cè)
　　目的：
　　使用3D打印機(jī)制備由PLA/HA復(fù)合材料組成的多孔支架，通過(guò)體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其生物相容性。
　　方法：
　　1.使用3D打印機(jī)制備PLA/HA復(fù)合物多孔支架，測(cè)量支架孔隙率，并利用Micro CT和SEM觀(guān)察支架結(jié)構(gòu)。
　　2.參照醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（GB/T16886）提取支架浸提液，根據(jù)美國(guó)藥典五級(jí)毒性評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK-

4、8檢測(cè)支架浸提液的細(xì)胞毒性。
　　3.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與支架復(fù)合培養(yǎng)的黏附增殖情況。
　　4.選用熒光顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞與支架共培養(yǎng)之后其形態(tài)學(xué)的變化。
　　5.通過(guò)SD大鼠皮下植入支架試驗(yàn)術(shù)后1、3、4w取組織做切片HE染色，觀(guān)察支架周?chē)仔约?xì)胞以及新生血管，成纖維細(xì)胞的情況
　　結(jié)果：
　　1.成功制備了3D復(fù)合多孔支架，支架孔隙率為0.6763±0.

5、03592，Micro CT掃描及SEM掃描結(jié)果顯示支架孔徑大小統(tǒng)一，層次分明，支架內(nèi)有HA顆粒均勻分布，支架表面有大小一致的細(xì)小孔隙。
　　2.PLA/HA復(fù)合多孔支架不同濃度浸提液細(xì)胞毒級(jí)評(píng)分為0級(jí)或1級(jí)，無(wú)細(xì)胞毒性。
　　3.細(xì)胞與支架共培養(yǎng)后，支架上粘附的細(xì)胞隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加（P＜0.05）。
　　4.BMSCs在支架上黏附，增殖，遷移，顯示出良好的細(xì)胞相容性。
　　5.皮下植入支架實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在植