氯霉素核酸適體的篩選及基于核酸適體生物傳感器的建立.pdf

1、氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一類有效的廣譜類抗生素，能有效地抑制革蘭氏陰性和陽性細菌，但據(jù)最新的醫(yī)學研究成果報道表明氯霉素對人體存在潛在如白血病類的致命性危害。所以，許多國家包括美國、加拿大和中國已經(jīng)禁止在動物產(chǎn)品中使用氯霉素，歐盟(European Union，EU)也建立了氯霉素殘留的最低檢測限(minimum required performancelimit，MRPL)為0.3×10-6 g·kg-1。因此

2、，建立快速高效的氯霉素檢測方法是目前一項迫切的任務。
　　核酸適體(又稱適配體，aptamer)是通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技術篩選得到的能夠與靶分子特異性結合的一小段ssDNA或RNA。適體具有靶分子廣泛、親和力強、易修飾等優(yōu)點，在分析化學、食品安全、臨床診斷與治療等方面應用廣泛。
　　本文以

3、氯霉堿為靶分子，通過SELEX技術篩選出氯霉素特異核酸適體，然后建立了一種基于實時熒光定量PCR技術的核酸適體生物傳感器，并將其用于檢測牛奶樣品中氯霉素含量。
　　1、通過將氯霉素堿(CAP-base)與羧基磁珠偶聯(lián)，以乙醇胺為反篩物，利用磁珠-指數(shù)擴增配體的系統(tǒng)(Mag-SELEX)技術篩選氯霉素核酸適體。通過10輪篩選，得到了能5條可與CAP結合的寡核苷酸適體群(No.1、No.4、No.5、No.6和No.10)。這五條核酸

4、適體具有較好的親和能力，但彼此之間的同源性較低;其解離常數(shù)(Dissociation constant，Kd)的范圍0.03224～0.3244μM。挑選Kd值最低的兩條核酸適體(No.4和No.5)進行特異性研究，結果表明No.5的特異性優(yōu)于No.4。結合親和力與特異性分析，No.5是CAP的特異性核酸適體。因此，No.5將作為識別元件應用于后續(xù)的核酸適體生物傳感器的建立。
　　2、建立了基于實時熒光PCR的核酸適體生物傳感器。