金針菇菌柄基部多糖的提取、純化及細(xì)胞免疫活性研究.pdf

1、金針菇營(yíng)養(yǎng)極為豐富，目前已發(fā)展成為世界第三大食用菌。隨著人類對(duì)保健品以及金針菇營(yíng)養(yǎng)價(jià)值認(rèn)識(shí)的逐漸加深，金針菇將有非常廣闊的開發(fā)前景，與此同時(shí)，也會(huì)有越來(lái)越多的金針菇菌柄基部廢料的產(chǎn)生，但是在現(xiàn)有的報(bào)道中，關(guān)于金針菇的研究大多都是關(guān)于子實(shí)體和菌絲體，目前還沒有針對(duì)金針菇菌柄基部廢料的研究，所以本研究的目的就是將該廢料充分利用起來(lái)，既能減少其對(duì)環(huán)境的污染，更重要的是能夠提高其利用價(jià)值。
　　 論文采用響應(yīng)曲面中的Box-Behnke

2、n對(duì)超聲波提取金針菇菌柄基部多糖(FSP)影響其得率的三個(gè)因素即超聲功率、超聲時(shí)間和水料比進(jìn)行優(yōu)化。利用Design Expert軟件分析得出金針菇菌柄基部多糖提取的最佳工藝條件為超聲功率680W、超聲時(shí)間19.8min，水料比28mL/g，使用此條件，金針菇菌柄基部多糖的得率為16.20％，與預(yù)測(cè)值16.40％沒有顯著性差異，并且與傳統(tǒng)的熱水提取比較，多糖得率提高了70％，提取時(shí)間減少了92％。
　　 通過DEAE-纖維素-5

3、2柱層析分級(jí)純化金針菇菌柄基部粗多糖，得到三個(gè)多糖組分FSP-1、FSP-2和FSP-3。運(yùn)用物理和化學(xué)的方法分別測(cè)定了金針菇菌柄基部粗多糖及其純化組分FSP-1、FSP-2和FSP-3基本的理化性質(zhì)。對(duì)于粗多糖、FSP-1、FSP-2和FSP-3總糖含量分別為64.19％、99.19％、96.42％和65.17％;蛋白質(zhì)含量分別為3.74％、未檢出、2.07％和3.00％;糖醛酸含量分別為2.94％、4.63％、3.40％和1.72％

4、;硫酸基含量分別為0.55％、0.49％、1.37％和0.32％。紅外光譜掃描結(jié)果顯示，粗多糖、FSP-1、FSP-2和FSP-3含有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰、羧基的吸收峰、吡喃糖環(huán)的吸收峰。紫外光譜掃描結(jié)果顯示，粗多糖中蛋白質(zhì)含量較高，F(xiàn)SP-3中蛋白質(zhì)含量較低，而FSP-1和FSP-2中不含有蛋白質(zhì)或含有微量蛋白質(zhì)不足以檢出。FSP-1由6種單糖組成， FSP-2由7種單糖組成， FSP-3由8種單糖組成。
　　 通過巨噬細(xì)胞

5、培養(yǎng)，得到金針菇菌柄基部粗多糖及其各純化組分能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖，粗多糖濃度在5μg/mL時(shí)，對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響最大，增殖率達(dá)到121.52％。粗多糖及其純化組分對(duì)巨噬細(xì)胞增殖率大小的順序?yàn)镕SP-1＞FSP-2＞粗多糖＞FSP-3。通過吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)，得到粗多糖及各個(gè)純化組分FSP-1、FSP-2,、FSP-3均能不同程度地刺激巨噬細(xì)胞吞噬中性紅，對(duì)于吞噬能力來(lái)說，也是FSP-1效果最好，粗多糖和FSP-3沒有顯著差

6、異，F(xiàn)SP-2效果最差。
　　 通過小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，得到金針菇菌柄基部粗多糖及其純化組分，對(duì)B16F10的增殖有一定的抑制作用而用粗多糖及其純化組分培養(yǎng)巨噬細(xì)胞的上清對(duì)B16F10的抑制率抑制最高可達(dá)23.71％，與多糖直接作用相比，抑制率提高了115.9％。通過小鼠成纖維肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，得到金針菇菌柄基部粗多糖及其純化組分濃度范圍在5～50μ g/mL時(shí)對(duì)L929抑制率最大為7.85％，而用粗多糖及其純化組分培養(yǎng)巨