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文檔簡介
1、采用平板透明圈法初篩和搖瓶培養(yǎng)復篩的方法從25株蟲生真菌篩選出產(chǎn)海藻糖酶最高的菌株。
采用單因素篩選法來研究碳源、氮源以及維生素等對產(chǎn)酶量的影響,結(jié)果表明可溶性淀粉、蛋白胨、VB2、pH6和金屬離子K+為最適合海藻多糖酶發(fā)酵培養(yǎng)單因素。座殼孢最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基為2.5 g/L的可溶性淀粉、5g/L蛋白胨、4×10-4mol/LK+、o.05g/LVB2和pH5.5;最佳產(chǎn)酶條件為為接種量15ml、裝液量50 mL、菌齡7d和培
2、養(yǎng)時間3d。在液體搖瓶發(fā)酵條件下利用優(yōu)化的培養(yǎng)條件,座殼孢WYTM-2海藻糖酶產(chǎn)酶活力達到29.38U/mL。
以最優(yōu)培養(yǎng)基在最優(yōu)條件下培養(yǎng)座殼孢WYTM-2獲得的發(fā)酵液為材料,經(jīng)硫酸銨沉淀、離子交換和凝膠層析,獲得純化的海藻糖酶;經(jīng)SDS-PAGE電泳驗證表明該純酶蛋白的分子量約為40KDa。
對純化的海藻糖酶進行酶學特性研究,結(jié)果表明,該酶的最適作用溫度為30℃,在40℃條件下穩(wěn)定性最好;該酶在pH-16
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