MMP-2 siRNA對(duì)小鼠肝泡狀棘球蚴生長(zhǎng)影響的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探究MMP-2在泡球蚴在宿主肝內(nèi)侵襲性生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的作用。
　　方法：
　　14w齡健康雌性昆明小鼠245只，將小鼠隨機(jī)分為以下7組。A組：空白對(duì)照組；B組：陰性對(duì)照組；C組：模型對(duì)照組；D組：空載體腺病毒組；E組：陰性序列腺病毒組；F組：MMP-2干擾腺病毒預(yù)處理組；G組：MMP-2干擾腺病毒組。A、B、C三組小鼠不實(shí)行干預(yù)，D、E、G、F四組小鼠分別尾靜脈注射空載體腺病毒、陰性干擾腺病毒、MMP-2干擾腺

2、病毒、PBS。建立100天后對(duì)各組小鼠行安樂死大體觀察每組肝泡球蚴生長(zhǎng)情況，計(jì)算各組肝臟E. m感染率、囊濕重及減蚴率。HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)改變，TUNEL法檢測(cè)遠(yuǎn)處肝細(xì)胞、近穿刺部位或近E. m肝細(xì)胞和肝E.m組織周圍炎細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptotic index, AI)，ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清MMP-2、TIMP-2的表達(dá)。采用Caspase-3活性試劑盒檢測(cè)各組小鼠肝E.m組織中、近穿刺部位或近E.m肝組織和遠(yuǎn)處肝組織C

3、aspase-3的含量，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)泡球蚴囊壁周圍Ⅳ型膠原表達(dá)含量。
　　結(jié)果：
　　C、D、E、F、G組小鼠肝臟泡狀棘球蚴感染率依次為72.4％、70.0%、71.4%、72.0%、70.8%，此5組小鼠肝臟E. m感染率無差異（P＞0.05）。囊濕重：C、D、E、F組的肝臟E. m組織的質(zhì)量在組間比較中均無差異（P＞0.05），G組與C、D、E、F組相比較明顯降低（P＜0.05）。減蚴率：G組與D、E、F組相比

4、較明顯增高（P＜0.05）。TUNEL法檢測(cè)各組遠(yuǎn)處肝細(xì)胞的AI均無差異（P＞0.05）；所有接種肝E. m組中近E.m肝細(xì)胞比遠(yuǎn)處肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)相比較明顯增高（P＜0.05）；G組近E.m肝細(xì)胞AI高于B組，低于C、D、E、F組，均有顯著性差異（P＜0.05）；C、D、E、F組中E.m組織周圍炎細(xì)胞AI無差異（P＞0.05），G組分別與上述各組相比較明顯降低（P＜0.05）。小鼠血清MMP-2含量：C、D、E組間比較均無差異(P＞0

5、.05)，C、D、E三組分別與A、B、F、G四組相比較明顯增高(P<0.05)，F(xiàn)組與C、D、E、G組相比較明顯降低(P<0.05)，G與C、D、E、F相比較明顯降低(P<0.05)。小鼠血清TIMP-2含量：A、B、C、D、E、F、G七組組間比較均無差異(P＞0.05)，但C、D、E組較A、B組增高。小鼠血清MMP-2/TIMP-2比值：G與A、B、C、D、E、F組相比較明顯降低(P<0.05)。各組小鼠遠(yuǎn)處肝組織中Caspase-3

6、含量均無差異(P＞0.05)，C、D、E、F、G組近E.m處肝組織caspase-3含量與B組近穿刺部位肝組織Caspase-3含量相比較明顯增高（P＜0.05），C、D、E組近E.m肝組織Caspase-3含量與自身遠(yuǎn)處肝組織的Caspase-3含量相比明顯增高(P<0.05)，F(xiàn)、G組近E.m肝組織的Caspase-3含量較自身遠(yuǎn)處肝組織Caspase-3含增高，但無差異（P＞0.05），C、D、E組近E.m肝組織Caspase-3

7、含量相比較無差異（P＞0.05），F(xiàn)、G組近E.m肝組織Caspase-3含量分別與C、D、E組相比較明顯減低(P<0.05)，G組E.m內(nèi)Caspase-3含量分別與C、D、E、F組相比較明顯增高(P<0.05)。小鼠泡球蚴囊壁中Ⅳ型膠原表達(dá)含量：G組與C組、D組、E組、F組相比較明顯增高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　MMP-2在小鼠肝泡狀棘球蚴病中呈高表達(dá)，泡球蚴在宿主體內(nèi)生長(zhǎng)過程中可以促進(jìn)宿主周圍組織分泌MMP-

8、2，利用MMP-2 siRNA抑制小鼠體內(nèi)MMP-2的表達(dá)，抑制了肝泡狀棘球蚴的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，因此，MMP-2在泡狀棘球蚴宿主肝內(nèi)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)過程中起到重要作用。
　　1.抑制宿主體內(nèi)MMP-2的表達(dá)，抑制了肝泡球蚴周圍基質(zhì)的降解，阻礙了肝泡球蚴的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。
　　2.降低MMP-2/TIMP-2的比值，能抑制肝泡狀棘球蚴的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。
　　3.抑制宿主體內(nèi)MMP-2的表達(dá)，抑制了泡球蚴周圍肝細(xì)胞及炎細(xì)胞的凋亡，可能在抑制