骨髓造血細(xì)胞移植治療克羅恩病的動物研究.pdf

1、目的： 克羅恩病(CD)是一種病因未明的胃腸道慢性炎性肉芽腫性疾病，本病與潰瘍性結(jié)腸炎(UC)統(tǒng)稱為炎癥性腸病(IBD)。本病在歐美多見，且有增多趨勢，近年來我國發(fā)病率也逐步上升。本病病因和發(fā)病機(jī)制迄今未明，目前認(rèn)為是由多種因素相互作用所致，主要包括感染、遺傳易感性、免疫系統(tǒng)失常等因素。迄今尚無治愈IBD的特效方法，尋找治療的新策略日益迫切。近年有對血液系統(tǒng)疾病合并IBD者行干細(xì)胞移植治療的報道，主要集中在遺傳和免疫兩個方面，缺

2、乏系統(tǒng)的實驗證據(jù)。本實驗旨在探討同種異體大鼠骨髓HCs移植于CD模型體內(nèi)后，其在結(jié)腸和其它器官的定位情況，為干細(xì)胞移植治療CD提供動物研究的理論基礎(chǔ)。 材料與方法： 試驗對象選擇健康雌性SD大鼠，體重180-200克，54只。隨機(jī)分為移植組(A組)、模型對照組(B組)和生理鹽水對照組(C組)，每組分別為18只。A組和B組采用三硝基苯磺酸(TNBS)與酒精復(fù)合灌腸法建立CD模型，C組用生理鹽水灌腸作為對照。用懸浮培養(yǎng)法在體

3、外培養(yǎng)獲得雄性SD大鼠的HCs，移植前24小時以終濃度為10μmol/L的5-溴-2-脫氧尿嘧啶(BrdU)標(biāo)記細(xì)胞。A組造模后24小時，將1ml含約2x10<'7>個HCs的細(xì)胞懸液經(jīng)尾靜脈注入A組體內(nèi)；B、C組則同時經(jīng)尾靜脈注射1 mL生理鹽水作為對照。分別于移植后的第7、14及21天每組各取6只大鼠，用乙醚麻醉后取全段大腸組織和肝臟、胃、胰腺的部分組織用于組織病理學(xué)觀察和免疫組化檢測。病理組織學(xué)觀察的方法為將組織制成石蠟切片后于顯

4、微鏡下觀察。免疫組化采用SP免疫組化染色法檢測CD模型組織BrdU陽性細(xì)胞，以確定HCs在CD模型腸道及其它器官的定位情況。結(jié)論： 1．同種異體大鼠骨髓造血細(xì)胞移植后其能在克羅恩病模型腸道中定位，移植組移植后第14天和第21天的病變區(qū)BrdU標(biāo)記陽性細(xì)胞比例高于同時間段非病變區(qū)。 2．同種異體大鼠骨髓造血細(xì)胞移植后其亦能在克羅恩病模型的肝臟中定位。 3．骨髓造血細(xì)胞的定位可能與克羅恩病病變的嚴(yán)重程度和局部血供豐富