小鼠抗人TNF單抗結(jié)合域和親和力的預(yù)測及其中和活性表位鑒定.pdf

1、腫瘤壞死因子(TNF)是由3個分子量為17kDa亞單位組成的同源三聚體的可溶型蛋白質(zhì),主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生.體內(nèi)還存在分子量為26kDa的膜結(jié)合形式的TNF.TNF不僅是具有多方面免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子,而且通過刺激巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子和介質(zhì),引起炎癥反應(yīng),導(dǎo)致組織的損傷.針對TNF的中和活性單克隆抗體在動物實驗中對內(nèi)毒素和細(xì)菌引起的病理改變有明顯的阻斷作用.但鼠源性單抗在人體使用時,對人體具有免疫

2、原性,可引起免疫反應(yīng),導(dǎo)致對抗體的清除,并引起免疫復(fù)合物介導(dǎo)的超敏反應(yīng).為了解決上述問題,建立了對鼠源性抗體改造的多種方法,如構(gòu)建嵌合抗體或人源化抗體.在嵌合抗體構(gòu)建過程中,最為重要的是篩選具有良好親和力及中和活性的鼠源性親本抗體,克隆其輕鏈和重鏈可變區(qū)基因.然后將可變區(qū)基因與人抗體恒定區(qū)基因連接,構(gòu)建重組抗體基因.最后,將構(gòu)建好的鼠-人嵌合基因?qū)胝婧思?xì)胞中,表達(dá)嵌合抗體.我們利用免疫學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息學(xué)等方面的技術(shù),對小鼠抗人