骨碎補-聚乳酸—羥基乙酸共聚物微囊的實驗研究.pdf

1、目的:提取骨碎補中總黃酮成分，制備骨碎補總黃酮/聚乳酸-羥基乙酸共聚物(DR/PLGA)微囊，并對微囊制備條件進行優(yōu)化，制備出微囊粒徑較小、分散均勻、包封率較高的微囊。CCK-8法觀察DR/PLGA微囊對小鼠成骨細胞株MC3T3-E1生長的影響。
　　方法:
　　1、取燙制骨碎補經(jīng)粉碎后，置于回流提取裝置中提取得到的骨碎補總黃酮。以柚皮苷為標準品，對所提取的骨碎補中總黃酮含量進行考察。
　　2、在一定制備條件下，按照乳

2、化溶劑揮發(fā)法制備DR/PLGA微囊，于PLGA濃度、攪拌速度、初乳乳化時間、水油比值等不同單因素條件下利用顯微鏡觀察微囊大體形態(tài)、掃描電鏡及透射電鏡觀察微囊表面形態(tài)、粒徑分析儀觀察微囊粒徑分布寬度、分光光度計測量微囊中總黃酮包封率對微囊進行考察，篩選出微囊粒徑較小、分散均勻、包封率較高的DR/PLGA微囊。
　　3、將DR/PLGA微囊在無菌條件下與小鼠成骨細胞株MC3T3-E1共同培養(yǎng)，CCK-8法觀察DR/PLGA微囊對細胞增

3、殖的影響。
　　結(jié)果:
　　1、通過紫外分光光度計檢測，浸膏中總黃酮含量為9.95％。
　　2、分別于PLGA濃度、初乳攪拌速度、初乳乳化時間、水油比值四種單因素條件下考察其對微囊形態(tài)、分散情況、微囊包封率的影響。①顯微鏡下對微囊大體形態(tài)及粒徑分布觀察發(fā)現(xiàn)當PLGA濃度小于140 mg/mL、攪拌速度在2000-4000 rpm、初乳乳化時間在4-6分鐘、初乳水油比值大于1∶10時微囊分散良好，粒徑分散較均勻，粒徑分布

4、較窄。②通過紫外分光光度計測量微囊中骨碎補總黃酮包封率來衡量微囊質(zhì)量，結(jié)合顯微鏡觀察結(jié)果。確定最佳工藝參數(shù)為:PLGA溶液濃度140 mg/mL，勻漿機攪拌速度2000 rpm，初乳乳化時間6分鐘，水油比比值1∶15。③優(yōu)化工藝下所制備的微囊顯微鏡下觀察顯示微囊分布均勻，粒徑分布寬度較窄，掃描電鏡及透射電鏡觀察所見微囊呈圓形，邊緣較規(guī)則。粒徑掃描顯示微囊平均粒徑為789.8±712.3 nm，分布相對較窄，基本小于5μm。紫外分光光度計

5、所測微囊平均包封率為47.72％。
　　3、將制備好的DR/PLGA微囊與小鼠成骨細胞株MC3T3-E1共同培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)當微囊濃度為0.1 mg/mL、0.5 mg/mL時，細胞活力無明顯增加。當微囊濃度大于1 mg/mL時，隨微囊濃度的增加，吸收度A450值也增大。統(tǒng)計學具有意義。
　　結(jié)論:本實驗提取了骨碎補中有效成分總黃酮，并制備了DR/PLGA微囊，并對其制備條件進行優(yōu)化，制備出粒徑較小、分散較均勻、粒徑分布寬度較窄、