HSP27通過PI3K-PKCζ-Sp1信號(hào)通路促進(jìn)ABCA1表達(dá)和膽固醇流出.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)主要觀察HSP27對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的影響，并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：將THP-1細(xì)胞中加入佛波酯，同時(shí)用ox-LDL孵育使之轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞，并加入HSP27（不同濃度）以及siRNA即小分子干擾RNA等因素處理后，采用Western blot和半定量RT-PCR檢測(cè)ABCA1蛋白質(zhì)的表達(dá)和mRNA表達(dá)，采用高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固

2、醇，游離膽固醇和膽固醇酯含量，使用液體閃爍計(jì)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出。以PI3K抑制劑或PKCζ阻斷劑或SP1抑制劑對(duì)HSP27作用下的細(xì)胞共處理24小時(shí)，觀察對(duì)ABCA1表達(dá)的影響。不同形式HSP27處理THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞24h，Western blot檢測(cè)HSP27對(duì)PKCζ和SP1磷酸化水平的影響。
　　結(jié)果： HSP27上調(diào)ABCA1的表達(dá)，增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，從而減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積；3D HSP27增加PI3