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文檔簡介
1、目的：研究IRF-1通過Sp1影響Ki-67基因核心啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性，為以Ki-67為靶點(diǎn)的腫瘤治療奠定基礎(chǔ)。
方法：通過雙熒光素酶活性檢測技術(shù)鑒定72小時(shí)內(nèi)Ki-67基因核心啟動(dòng)子活性的變化趨勢以及IRF-1過表達(dá)對其轉(zhuǎn)錄活性的影響；通過RT-PCR和細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢測IRF-1對Ki-67 mRNA及蛋白水平的影響；通過RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測IRF-1對Ki-67順式作用組件Sp1 mRNA及其蛋白
2、水平的影響。使用雙熒光素報(bào)告分析系統(tǒng)檢測Sp1對Ki-67核心啟動(dòng)子活性的影響；用CCK-8檢測IRF-1過表達(dá)對增殖影響；用Annexin V-PI檢測IRF-1過表達(dá)對腎細(xì)胞癌Ketr-3凋亡影響。
結(jié)果：在Ketr-3細(xì)胞中IRF-1以劑量依賴的方式抑制Ki-67mRNA及其蛋白的表達(dá)；IRF-1以劑量依賴的方式抑制Ki-67順式作用組件Sp1蛋白的表達(dá)，而Sp1在mRNA水平無明顯變化。在786-O細(xì)胞中當(dāng)我們使用小干
3、擾沉默IRF-1后Ki-67 mRNA、蛋白，Sp1蛋白表達(dá)均上調(diào)，Sp1mRNA表達(dá)水平未見明顯變化。在Kerr-3細(xì)胞中IRF-1過表達(dá)能以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制Ki-67基因核心啟動(dòng)的活性，當(dāng)Ki-67核心啟動(dòng)子3個(gè)Sp1結(jié)合位點(diǎn)全部突變后IRF-1幾乎失去了對其轉(zhuǎn)錄活性的抑制。在Ketr-3細(xì)胞中IRF-1過表達(dá)能明顯抑制腎癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
結(jié)論：IRF-1通過Sp1依賴的途徑調(diào)節(jié)Ki-67基因核心啟動(dòng)子的
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