轉(zhuǎn)錄因子Sp3對(duì)Ki-67基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響.pdf

1、目的：明確轉(zhuǎn)錄因子Sp3對(duì)人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人胚腎細(xì)胞(HEK293)Ki-67基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　 方法：
　　 1.Sp3真核表達(dá)載體pCMV-Sp3作用于人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人胚腎細(xì)胞(HEK293)，用熒光定量PCR檢測(cè)Sp3的過表達(dá)對(duì)Ki-67mRNA的表達(dá)的影響，用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)Sp3的過表達(dá)對(duì)質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的變化。
　　 2.Sp3小干擾

2、shRNA作用于人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人胚腎細(xì)胞(HEK293),用熒光定量PCR檢測(cè)Sp3的表達(dá)下降對(duì)Ki-67mRNA的表達(dá)的影響，用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的變化。
　　 3.將Sp3真核表達(dá)載體pCMV-Sp3及Sp1真核表達(dá)載體pN3-Sp1共轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞、HEK293細(xì)胞，用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的變化。
　　

3、結(jié)果：
　　 1．過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Sp3顯著抑制Hela、HEK293細(xì)胞Ki-67mRNA表達(dá)水平(P＜0.05)，與pCMV-Sp3共轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子活性也有不同程度的降低，在Hela、HEK293兩種細(xì)胞中的啟動(dòng)子活性分別為未行共轉(zhuǎn)染的BK235的55.8％、45.6％。
　　 2.Sp3 shRNA作用于Hela、HEK293細(xì)胞其Ki-67mRNA的表達(dá)量均有增加(P＜0.05)，與Sp3 s

4、hRNA共轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子活性也有不同程度增加。在Hela、HEK293細(xì)胞中分別升至未行共轉(zhuǎn)染的BK235的1.21倍、1.24倍。
　　 3.pCMV-Sp3與pN3-Sp1以不同比例共轉(zhuǎn)染于Hela、HEK293細(xì)胞，對(duì)質(zhì)粒pGL4-BK235啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響是：Sp3與Sp1的比值下降誘導(dǎo)Ki-67基因的表達(dá)，比值升高抑制Ki-67基因的表達(dá)。
　　 結(jié)論：Sp3真核表達(dá)質(zhì)粒pCMV-Sp