轉(zhuǎn)錄因子Sp1對肺腺癌細胞A549中生存素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)錄因子-特異性蛋白1(specificity protein1,Sp1)在肺腺癌細胞A549中對生存素（survivin）轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。
　　方法:1.免疫組化SP法檢測120例非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和40例良性肺疾病患者手術(shù)標本中survivin和Sp1蛋白的表達情況，并分析兩者表達的相關(guān)性。2.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測人肺腺癌細胞株-A

2、549細胞中survivin和Sp1 mRNA的表達。3.在本室構(gòu)建好的含survivin核心啟動子的熒光報告載體上,基因定點突變survivin核心啟動子上經(jīng)電泳遷移率變動分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)證實存在的-121bp~-116bp處的Sp1結(jié)合位點，并轉(zhuǎn)染至A549細胞中,測定螢光素酶的表達活性，比較survivin核心啟動子片段及其突變體在A549細胞中的表達活性差

3、異。4.化學合成法構(gòu)建靶向Sp1基因的RNA小干擾片段(small interference RNA,siRNA),脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染至A549細胞,熒光定量RT-PCR及Western-blot法檢測Sp1及survivin mRNA和蛋白表達。
　　結(jié)果:1.NSCLC組織中survivin和Sp1的陽性表達率分別為81.6％(98／120)和62.5％(75／120);良性肺疾病組織中兩者陽性表達率分別為0和7.5%(3／40)

4、,二者表達呈正相關(guān)(rs'=0.214, P<0．05)。2. A549細胞中survivin和Sp1 mRNA均表達。3.含有survivin核心啟動子（pGL3-SVP230-luc）及其突變體（pGL3-SVP231-luc）的螢光報告載體在 A549細胞中的活性，均高于陽性對照組 pGL3-control和陰性對照組 pGL3-basic(p<0.05)。在 A549細胞中， pGL3-SVP230-luc的相對活性為40.99

5、;高于pGL3-SVP231-luc的25.94(p<0.05)。4.通過RNAi下調(diào)Sp1的表達,能降低A549細胞中survivin mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)論:1.非小細胞肺癌組織中survivin蛋白和Sp1蛋白均高表達且二者表達呈正相關(guān)。2.A549細胞內(nèi)survivin和Sp1mRNA均高表達。3.survivin啟動子上的Sp1結(jié)合位點-121bp~-116bp對其活性具有正性作用。4.靶向Sp1的siRNA,