轉(zhuǎn)錄因子sp1在肝癌細(xì)胞NRAGE表達(dá)調(diào)控中的作用.pdf

1、原發(fā)性肝癌是一種病死率很高的惡性腫瘤,死亡率高居世界第三位,中國(guó)第二位。并且肝癌的發(fā)病率還在不斷上升。肝癌的生成涉及許多基因的變化,基因變化的積累引起控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化機(jī)制的紊亂。
　　 以往的研究表明NRAGE可以起到抑制細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的多種作用,因此在很多腫瘤組織中表達(dá)量降低。但我們的前期工作卻發(fā)現(xiàn)NRAGE在肝癌組織及細(xì)胞中特異性的高表達(dá)。
　　 為了研究NRAGE在肝癌中高表達(dá)的原因

2、,我們通過(guò)軟件分析了NRAGE的啟動(dòng)子區(qū)域,并發(fā)現(xiàn)此區(qū)域含有三個(gè)Sp1結(jié)合位點(diǎn),Sp1是一種廣泛存在的核轉(zhuǎn)錄因子,是一類序列特異性的DNA結(jié)合蛋白,可特異性結(jié)合富含GC/GT序列的基因調(diào)控序列,從而調(diào)控多種基因的轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄因子SP1在一些腫瘤組織中異常表達(dá)和活化,參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成等多種生物學(xué)功能,并可作為預(yù)后的指標(biāo)。有研究表明在肝癌組織中Sp1是高表達(dá)的。因此我們推測(cè)轉(zhuǎn)錄因子Sp1可以調(diào)控NRAGE基因的轉(zhuǎn)錄,并導(dǎo)致

3、NRAGE在肝癌中表達(dá)量增高。
　　 本文通過(guò)構(gòu)建NRAGE啟動(dòng)子缺失突變體的報(bào)告基因,研究轉(zhuǎn)錄因子Sp1在肝癌細(xì)胞中對(duì)NRAGE轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。
　　 首先成功克隆出NRAGE啟動(dòng)子區(qū)域的缺失突變體報(bào)告基因,經(jīng)過(guò)Luciferase檢測(cè)發(fā)現(xiàn)NRAGE轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-300至-100bp和1至60bp存在的兩個(gè)Sp1結(jié)合位點(diǎn)可能在NRAGE的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起到了重要作用,缺失后顯著抑制NRAGE的轉(zhuǎn)錄。
　　 其次

4、,通過(guò)Sp1的RNA干擾和Sp1結(jié)合位點(diǎn)的點(diǎn)突變,進(jìn)一步證明NRAGE在肝癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄受Sp1的調(diào)控,當(dāng)Sp1被干擾或者Sp1結(jié)合位點(diǎn)突變后,NRAGE的轉(zhuǎn)錄活性受到顯著抑制。
　　 最后通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀證實(shí)Sp1是通過(guò)直接與NRAGE啟動(dòng)子結(jié)合實(shí)現(xiàn)調(diào)控NRAGE基因轉(zhuǎn)錄的。
　　 上述結(jié)果證明,肝癌細(xì)胞中NRAGE的特異性高表達(dá)與Sp1在肝癌細(xì)胞中的高表達(dá)有關(guān),Sp1通過(guò)直接與NRAGE基因啟動(dòng)子區(qū)域的Sp1結(jié)合