靶向抑制Sp1影響肝癌細(xì)胞增殖及血管新生的機制研究.pdf

1、本研究以肝癌作為研究對象，以轉(zhuǎn)錄因子Sp1為靶點，采用細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、實驗動物學(xué)等方法研究Sp1對肝癌細(xì)胞Huh-7及裸鼠荷瘤模型的影響及其機制、腫瘤靶向藥物的不同聯(lián)合對Sp1及其下游VEGF基因的影響及其機制。研究可分為三部分內(nèi)容：
　　 1.構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子Sp1特異性的siRNA質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染細(xì)胞利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建Huh-7細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Sp1的siRNA質(zhì)粒，經(jīng)測序后，通過HilyMax試劑轉(zhuǎn)染入Huh-7細(xì)胞，使Sp1

2、表達(dá)沉默，并篩選陽性克隆。
　　 2.研究轉(zhuǎn)錄因子Sp1對Huh-7細(xì)胞及動物模型的影響通過使用siRNA技術(shù)使Sp1表達(dá)沉默后，利用CCK8試劑研究Sp1對Huh-7體外細(xì)胞增殖的影響。與對照組比較，細(xì)胞培養(yǎng)24h之后，實驗組有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。通過動物荷瘤模型實驗，使用體內(nèi)生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀察，瘤體生長受到抑制(P<0.05)。
　　 3.研究不同靶向藥物的組合對轉(zhuǎn)錄因子Sp1及其下游基因的影響通過使用CH

3、ML、MithramycinA和Avastin三種藥物，并設(shè)計不同的藥物組合，體內(nèi)生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀察和使用Western Blot分析，研究藥物對動物模型中Sp1及其下游VEGF基因的影響。結(jié)果表明，三者的聯(lián)用效果最佳(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 通過構(gòu)建Sp1 siRNA質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染入Huh-7細(xì)胞，可使Sp1表達(dá)沉默。在體內(nèi)外的實驗中可得出Sp1的表達(dá)與腫瘤增殖情況成正相關(guān)的結(jié)論。通過不同藥物組合的干預(yù)，