靶向抑制轉(zhuǎn)錄因子Sp1阻斷類癌血管生成的系列研究.pdf

1、[研究背景]血管生成是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟和靶向治療的研究重點(diǎn)。本研究擬評(píng)價(jià)核轉(zhuǎn)錄因子Spl作為抑制類癌血管生成高效靶點(diǎn)的價(jià)值；明確化療藥物光神霉素(Mithramycin-A)抑制Spl表達(dá)的分子機(jī)制；研究VEGF單克隆抗體BevacizLlmab(Avastin)阻斷VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)Spl的影響；為開(kāi)發(fā)兼顧轉(zhuǎn)錄因子Spl及其下游效應(yīng)分子VEGF的“雙重靶向治療策略”提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [資料與方法]用免疫組化染色檢測(cè)35例類

2、癌組織中Spl表達(dá)，評(píng)價(jià)Spl表達(dá)與VEGF、微血管密度(MVD)等因素及患者預(yù)后的關(guān)系。用RNA干擾技術(shù)(RNAi)敲低2株類癌細(xì)胞(NCI-H727及B0N-1)SDl表達(dá)，觀察該處理對(duì)VEGF表達(dá)的影響。用N0rtherrl blOt、westernbl0t及MTT方法評(píng)價(jià)光神霉素對(duì)類癌細(xì)胞Spl基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和細(xì)胞體外增殖的影響。用熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)(Luciferase assay)檢測(cè)光神霉素作用于Spl基因啟動(dòng)子的確切位

3、點(diǎn)。利用裸鼠皮下移植瘤模型，評(píng)價(jià)BevacizLimab、光神霉素，以及兩藥聯(lián)合方案對(duì)類癌生長(zhǎng)及血管生成表型的影響。 [結(jié)果]Spl蛋白在類癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)(74.3％，26/35)。Spl陽(yáng)性表達(dá)與病灶大小、VEGF表達(dá)及MvD明顯相關(guān)(P=0.003，P=0.002，P=0.012)；并與患者不良預(yù)后有關(guān)(P=0.025)。用siRNA下調(diào)spl表達(dá)后，VEGF表達(dá)隨之下降。光神霉素可抑制類癌細(xì)胞SDl 基因轉(zhuǎn)錄與復(fù)制

4、，并影響其體外增殖；上述效應(yīng)均呈劑量依賴性和時(shí)間依賴。報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果提示，光神霉素可抑制含2個(gè)spl結(jié)合位點(diǎn) (TGGGcGG)的spl啟動(dòng)子片斷活性(pGL3-FOR2)；對(duì)不含spl結(jié)合位點(diǎn)(pGL3-FORl)者則無(wú)此作用。體外培養(yǎng)環(huán)境下，Bevacizumab對(duì)類癌細(xì)胞生長(zhǎng)及Spl、VEGF蛋白表達(dá)無(wú)影響；但可明顯抑制裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)及血管生成；并上調(diào)瘤體內(nèi)spl及VEGF表達(dá)。加用光神霉素可糾正上述變化，并增強(qiáng)Bevaci