GDF11抑制肝癌細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、目的：研究GDF11過表達(dá)對肝細(xì)胞癌細(xì)胞系SMMC-7721體內(nèi)及體外增殖能力的影響，并初步分析其可能的作用機(jī)制。方法：構(gòu)建重組質(zhì)粒，包被慢病毒。篩選GDF11過表達(dá)的SMMC-7721細(xì)胞系(Lenti-GDF11 group)，同時(shí)以空載體感染組(Lenti-GFP group)及野生型細(xì)胞組(Control group)為對照。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120、144h時(shí)采用 CCK-8法檢測三種細(xì)胞體外增殖能力，繪制細(xì)胞

2、增殖曲線，檢測GDF11過表達(dá)對細(xì)胞體外增殖能力的影響；分別以500、1000、2000、5000個(gè)細(xì)胞的密度梯度接種，平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測GDF11過表達(dá)對細(xì)胞克隆形成能力的影響。配制不同梯度濃度的順鉑作用細(xì)胞24h，CCK-8法檢測GDF11過表達(dá)對 SMMC-7721細(xì)胞體外順鉑敏感性的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測三種細(xì)胞細(xì)胞周期分布。同時(shí)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組、空載體感染組及對照組細(xì)胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型。記錄成瘤時(shí)間，繪制移植瘤體內(nèi)生長曲線，2周

3、后，剖取腫瘤，稱取瘤重。應(yīng)用免疫組織化學(xué) SP-9000三步法檢測裸鼠移植瘤組織標(biāo)本中GDF11、Ki-67蛋白的表達(dá)及腫瘤微血管密度（Microvessel density, MVD），并對其表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。應(yīng)用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肝細(xì)胞癌細(xì)胞系SMMC-7721細(xì)胞中GDF11表達(dá)較弱，通過包被慢病毒，成功篩選GDF11過表達(dá)的SMMC-7721細(xì)

4、胞系。
　　2. CCK-8實(shí)驗(yàn)表明 GDF11過表達(dá)可以明顯抑制 SMMC-7721細(xì)胞體外增殖能力，在96、120及144h時(shí)抑制作用最顯著（P<0.05）。
　　3.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)表明GDF11過表達(dá)可以明顯降低SMMC-7721細(xì)胞體外克隆形成能力（P<0.05）。
　　4. GDF11過表達(dá)能夠增強(qiáng)肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞對順鉑敏感性，順鉑濃度取20μg/ml及40μg/ml時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、<0.05）。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布表明，GDF11過表達(dá)可將SMMC-7721細(xì)胞更多的捕獲在G1期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。
　　6.與對照組相比，GDF11過表達(dá)可明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤體內(nèi)增殖能力（P<0.001），且實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下移植瘤組織重量明顯小于對照組（P<0.001）。
　　7.實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下移植瘤組織中 GDF11蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組，而Ki

6、-67蛋白陽性率及MVD均明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006；P<0.001； P<0.001）。
　　8.分別對裸鼠皮下移植瘤組織中GDF11、Ki-67及MVD表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，GDF11蛋白陽性率與Ki-67蛋白表達(dá)成負(fù)相關(guān)（R2=-0.668,P=0.002），且GDF11蛋白陽性率與腫瘤組織MVD存在負(fù)相關(guān)（R2=-0.622,P=0.006）。
　　結(jié)論：
　　肝細(xì)胞癌細(xì)胞系SMMC-