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1、生長分化因子11(GDF11)是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族中的一種分泌型信號分子,又稱為骨形態(tài)發(fā)生蛋白11(BMP11)。從1999年發(fā)現(xiàn)至今,對GDF11的研究主要集中于其在早期胚胎發(fā)育中的調(diào)控作用,特別是在中軸骨骼的圖式形成以及腎發(fā)生中的作用。體長是豬育種中的一個重要的經(jīng)濟性狀,其長短與胸腰椎數(shù)密切相關(guān)。因此,研究DNA去甲基化對豬GDF11表達的影響,對于了解豬體長變異的表觀遺傳機制,具有重要科學(xué)意義和潛在的應(yīng)用價值。
2、 本研究可以分為兩個部分: 第一部分:用DNA甲基化抑制劑5-azaC處理豬腎近端小管上皮細胞系U~-PKl,提取細胞總RNA,運用RT-PCR和半定量PCR的方法分析不同的處理濃度和處理時間對豬GDF11表達的影響。結(jié)果表明:處理24h后0.5、1和3uM5-azaC處理組之間GDF11的相對表達量差異顯著(P<0.05);處理48h后差異不顯著;處理72h后,0.05、0.1、0.3、0.5、1和3μM 5-azaC處理
3、組之間差異顯著(P<0.05)。在每個處理濃度下,處理24、48和72h后GDF11的相對表達量差異極顯著(P<0.01)。 第二部分:根據(jù)GenBank公布的豬GDF11序列設(shè)計引物,利用來自6.5cm豬胚腎cDNA作為模板,通過PCR的方法克隆編碼豬GDF11蛋白羧基末端327個氨基酸的cDNA序列,將此序列連接入原核表達載體pGEX-6p-1中,測序驗證表明重組質(zhì)粒pGEX-6p-1-GDF11構(gòu)建成功。將重組的表達質(zhì)粒p
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